FTS-A抑制Rap1b表达对氧化应激大鼠肝细胞的影响

【作者】 袁建彬； 马莉； 高春柳； 刘艳芝； 连帅； 郭景茹； 杨焕民；

【机构】 黑龙江八一农垦大学动物科技学院；

【摘要】 目的冷刺激是寒区常见的应激原之一,它使畜产品质量降低,动物死亡率增加,给寒区畜牧业造成了巨大损失。目前,针对动物冷应激的研究尚无公认的应激诊断标志物,因此,本课题组前期利用iTRAQ技术,成功筛选出39种冷应激前后大鼠血浆差异表达的蛋白,通过生物信息学及WesternBlot技术分析并推测,Rap1b在大鼠冷应激的发生过程中发挥分子开关作用。方法为进一步研究Rap1b在动物应激发生过程中的关键作用,本试验采用法尼基硫代水杨酸酰胺（FTS-A）作为Rap1b的抑制剂,建立Rap1b低表达的大鼠肝脏细胞模型,再以H₂O₂氧化应激的刺激方式（体外模拟大鼠肝脏细胞冷应激）,探析Rap1b低表达对氧化应激大鼠肝脏细胞的影响。本试验主要通过qRT-PCR、Western Blot、以及ELISA等技术检测ERK通路的激活状态,氧化应激指标,应激指标的变化情况。结果抑制Rap1b表达可显著降低处于氧化应激状态的大鼠肝脏细胞B-raf、ERK磷酸化蛋白的表达量（P<0.01）,应激蛋白HSP70表达量（P<0.01）,以及抗氧化应激酶氧化型谷胱甘肽（GSSG）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）的分泌（P<0.01）。结论Rap1b在大鼠肝脏细胞低表达,可抑制氧化应激后大鼠肝脏细胞ERK通路的激活,HSP70的细胞保护作用以及肝脏细胞的抗氧化能力。更多还原