亚洲带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂EP45的表达及其杂交瘤细胞株的筛选与鉴定

【作者】 王立群； 梁盼红； 张少华； 侯俊玲； 李艳萍； 毛立； 骆学农；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室；

【摘要】 目的制备亚洲带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂EP45(Taserpin EP45)蛋白的单克隆抗体。方法设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫RNA为模板,经RT-PCR扩增获得Taserpin EP45的完整ORF。克隆至原核表达载体p ET-30a(+),转化大肠杆菌DH5α感受态细胞进行表达,应用Western-blot对重组蛋白反应原性进行分析。以纯化的重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株。结果 RT-PCR扩增获得的基因序列大小为1 362bp,编码453个氨基酸,重组融合蛋白的分子质量约60 ku,可被亚洲带绦虫囊尾蚴阳性血清识别。筛选获得了5株稳定分泌Taserpin EP45抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价均在1:2 430或以上,亚型分别为Ig G2b和Ig G1,且与虫体天然抗原发生反应。结论成功构建了能稳定分泌EP45的杂交瘤细胞株,为进一步研究Taserpin EP45的生物学功能和建立有效的亚洲带绦虫血清学检测方法奠定了基础。更多还原