紫癜性肾炎患儿FSP-1表达和新月体形成的关系

【作者】 任献国； 夏正坤； 刘志红；

【机构】 南京军区南京总医院儿科； 南京军区南京总医院肾病研究所；

【摘要】 目的:探讨纤维母细胞标志蛋白1(Fibroblast-specific protein 1,FSP-1)在儿童紫癜性肾炎(HenochSch(o|¨)nlein purpura nephritis,HSPN)肾小球新月体形成时的表达和分布;分析其作为生物标志物在HSPN患儿新月体形成的临床意义。方法:本研究获中国博士后基金(No.2013M532230)资助,前瞻性研究2012年6月1日至2014年6月1日南京军区南京总医院儿科通过肾活检病理诊断为HSPN的住院患儿72例,其中有新月体形成33例,无新月体形成39例;对照组为微小病变型(minimal change disease,MCD)患儿12例;分析患儿临床类型。用兔抗FSP-1多克隆抗体(Abcam,ab27957)对患儿肾组织进行免疫组化染色,染色结果应用计算机病理图像分析系统(TD-2000)进行图像分析;并应用免疫荧光双标记技术对患儿肾组织进行FSP1和足细胞特异胞质抗原podocalyxin的双重染色,证实FSP1在HSPN新月体形成患儿肾小球足细胞表达。为明确FSP1在足细胞的表达位置,应用免疫胶体金技术电镜下通过Hitach7500透射式电子显微镜观察。应用FSP1酶联免疫试剂盒(Abnova,KA2418)对患儿血清和晨尿进行ELISA检测,探讨血清及尿液FSP1水平和肾组织FSP1表达、临床类型以及新月体形成的关系。结果:纳入病例中,72例HSPN,年龄2到16岁,平均年龄8.7±3.1岁,男53例,女19例;12例MCD,年龄2到14岁,平均年龄5.3±2.6岁,男8例,女,4例。HSPN临床分型:单纯蛋白尿型9例,血尿合并蛋白尿型38例,肾炎性肾病型25例。免疫组化FSP-1染色经计算机病理图像分析系统(TD-2000)图像分析结果12例MCD患儿均为阴性;HSPN患儿有新月体形成组33例,无新月体形成组39例中FSP-1染色差异有显著性(t=7.3 1,P<0.01),有新月体形成组肾小球染色细胞集中在新月体及其周围。患儿肾组织经过FSP1和podocalyxin双重染色,并通过免疫胶体金技术结合电镜观察,证实FSP1在HSPN患儿肾小球足细胞胞浆内表达。所有患儿血清中未检测到FSP1;MCD患儿尿液未检测到FSP1;而HSPN患儿尿液FSP1水平和肾组织FSP1免疫组化染色图像分析结果,经sperman相关分析:r=0.691,p=0.001,具有正相关性。不同临床分型患儿尿液FSP1水平采用单因素方差分析,组间多重比较采用最小显著差数法(LSD,least significant difference)法,其结果显示三组间比较无统计学意义。经T检验,HSPN有新月体形成组和无新月体形成组患儿尿液FSP1水平有显著性差异(t=9.84,P<0.01)。结论:首次证实FSP1在HSPN患儿肾小球足细胞胞浆内表达,染色细胞集中在新月体及其周围。FSP1尿液检测值和肾组织免疫组化染色具有正相关性;尿液FSP1水平在有新月体形成组和无新月体形成组的患儿中存在差异,FSP1可以作为HSPN患儿新月体形成的生物标志物。更多还原