驯鹿Ghrelin基因克隆及其在各器官内的表达定位研究

【作者】 张曼； 金鑫； 刘骄； 杨银凤；

【机构】 内蒙古农业大学兽医学院；

【摘要】 Ghrelin主要是由胃产生的一种肽,具有刺激生长激素(growth hormone,GH)释放、促进食物的吸收和胃排空以及调节能量平衡、保护和促进愈合等多种生理功能。驯鹿是一种半野生动物,目前有关Ghrelin在驯鹿体内的作用还尚不明确。本研究为了得到驯鹿Ghrelin基因组DNA的全序列,以及了解Ghrelin在驯鹿各器官内的表达和定位情况,通过采用克隆技术、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、免疫组织化学等多种生物学技术进行研究。结果显示:驯鹿Ghrelin基因组DNA共4076 bp,由4个外显子和3个内含子组成。RT-PCR和RT-qPCR结果显示:在驯鹿的下丘脑、垂体、舌、食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、心、肺、肝、脾、肾、膀胱、输尿管、睾丸、附睾、输精管、淋巴结、甲状腺、胰、肾上腺、胸腺、精囊腺、骨骼肌等器官内Ghrelin均有表达,且在皱胃内的表达量最高,其次是胰、十二指肠、睾丸和食管,与下丘脑、垂体和舌等其余器官内的表达量相比较高。免疫组织化学结果揭示:Ghrelin的免疫阳性细胞在食管和皱胃内主要定位于黏膜层、黏膜下层和肌层;在瘤胃、网胃、瓣胃的黏膜层、黏膜下层中也可见Ghrelin的免疫阳性细胞,但肌层中未见表达;在肠道Ghrelin的免疫阳性细胞主要位于十二指肠、空肠、回肠、结肠的黏膜层、黏膜下层和肌层,尤其在肠绒毛和黏膜下层分布较多;在肝、胰、甲状腺、垂体前叶、睾丸、肺、肾、脾器官内均有Ghrelin的免疫阳性细胞。本研究首次成功克隆出驯鹿Ghrelin基因组DNA的全序列,填补了野生反刍动物Ghrelin的空白,同时丰富了反刍动物生物学资料。表达和定位结果表明Ghrelin在驯鹿各器官普遍分布,充分说明其具有广泛的生理作用,对人工饲养驯鹿具有重要的意义。更多还原