番木瓜环斑病毒西瓜株系侵染性克隆的构建及应用

【作者】 黄显德； 王玉； 程德杰； 刘锦； 闫志勇； 田延平； 李向东；

【机构】 山东农业大学植物保护学院植物病理学系；

【摘要】 利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)和RT-PCR获得了番木瓜环斑病毒西瓜株系山东分离物(PRSV-SD)的全基因组序列。PRSV-SD基因组(GenBank登录号为MF085000)全长10 337个核苷酸(nucleotides,nt),5′-和3′-非翻译区分别为90nt和206nt,含有一个开放阅读框,编码3 346个氨基酸的多聚蛋白。PRSV-SD与GenBank中18个PRSV分离物的全基因组核苷酸一致率为82.05%~89.3%,多聚蛋白的氨基酸一致率为90.6%~94.7%。构建了可通过农杆菌浸润接种的侵染性克隆pCamPRSV,可侵染西瓜、甜瓜、西葫芦、黄瓜等葫芦科作物。通过在PRSV核内含体蛋白b(NIb)和衣壳蛋白(CP)基因之间插入绿色荧光蛋白(GFP)基因,得到pCamPRSV-GFP,在紫外灯下可观察到绿色荧光。更多还原