稻瘟菌致病因子MoCon2的重组表达,纯化和晶体生长

【作者】 王超； 李国瑞； 彭友良； 刘俊峰；

【机构】 中国农业大学植物病理学系/农业部植物病理学重点开放实验室； 内蒙古民族大学生命科学学院； 农业生物技术国家重点实验室；

【摘要】 水稻作为当今世界主要的粮食作物,稻瘟菌（Magnaporthe grisea）是水稻的主要病害,每年造成的粮食损失相当于6 000万人口的粮食供给。稻瘟菌侵染水稻并导致其发病是一个复杂的过程,由大量致病相关因子参与并协同完成。对这些致病因子的研究能够为阐明稻瘟菌的致病机制和稻瘟病的防控提供一定的理论和实验依据。本课题组前期的研究发现,MoCon2是稻瘟菌在对水稻的致病过程中必需的致病因子,其缺失将会导致菌体生长缓慢,无分生孢子产生,附着胞能力下降,并完全丧失对宿主的致病性。通过酵母双杂、Co-IP等技术确定了MoCon2与其他的蛋白互作的重要功能结合域。为进一步解析MoCon2其致病作用的分子机理,作者利用x-射线晶体学方法对其进行了结构生物学的研究。通过解析MoCon2的蛋白三维结构,探索其执行功能的结构基础,阐述该蛋白的结构与功能关系及推测其调节致病的分子机制。首先选取了MoCon2全长和能够与MoCWF4、MoCWC2等多个蛋白互作的100²20AA区段,利用大肠杆菌表达了MoCon2¹⁰⁰²²⁰重组蛋白,并通过各种层析策略建立了截短体蛋白的纯化流程。采用坐滴法对制备的高纯度重组蛋白进行晶体生长条件的筛选,在0.1M Na cacodylate pH值5.5,25%PEG4000条件下得到蛋白的晶体。正在进一步优化结晶条件,以获得高质量的晶体和收集衍射数据。上述研究结果将为解析MoCon2晶体结构和分析其影响剪切的结构机制奠定基础。更多还原