漆酶基因在松杉灵芝生长发育中的功能研究

【作者】 孙淑静； 冯宏昌； 李哲； 李钊峰； 张杰； 吕书仪；

【机构】 福建农林大学生命科学学院；

【摘要】 本研究构建了含有松杉灵芝漆酶基因c DNA序列的表达载体p TE11-Laccase,同时利用实验室保存的含有一色齿毛菌漆酶基因全基因序列的表达载体p PICZα-Laccase分别转化松杉灵芝漆酶基因敲除菌株?Lac-A19和野生型菌株Gps1并成功构建了松杉灵芝漆酶基因回补菌株?Lac-A19/p TE11-Laccase、?Lac-A19/p PICZα-Laccase和过表达菌株Gps1/p TE11-Laccase、Gps1/p PICZα-Laccase,对以上菌株的漆酶基因转录水平q RT-PCR检测实验结果表明以上不同菌株间漆酶基因转录水平关系:Gps1/p PICZα-Laccase>Gps1/p TE11-Laccase>?Lac-A19/p PICZα-Laccase>Gps1>?Lac-A19/p TE11-Laccase>?L ac-A19;与此同时在对以上菌株产漆酶能力测定结果也表明:漆酶基因过表达菌株及野生型菌株产漆酶能力较高,敲除菌株?Lac-A19在PDA培养基上不能产生漆酶,回补菌株产漆酶能力发生较大程度提升。对以上不同菌株菌丝生长特性研究结果表明,高产漆酶的过表达菌株和出发菌株在PDA培养基上菌丝粗壮致密,生长速度较快,不产漆酶的敲除菌株?Lac-A19菌丝生长速度慢,菌丝稀疏且极易断裂和老化,电镜观察表明高产漆酶菌株菌丝粗壮发达且菌丝末端具有大量细小新生分支。出菇实验结果表明高产漆酶菌株在栽培料中菌丝生长速度较快,木质素降解效率高、生物学效率高、子实体产量高、色泽鲜亮、品质较好,显著优于敲除菌株?Lac-A19。结果表明漆酶在松杉灵芝菌丝生长和子实体的发育过程中具有重要作用。更多还原