结核分枝杆菌CFP-10与ESAT-6原核质粒的构建及表达

【作者】 王晓玮； 程筱雯； 徐元宏；

【机构】 安徽医科大学第一附属医院检验科；

【摘要】 目的构建结核分枝杆菌特异性分泌蛋白培养滤液蛋白10(CFP-10)及早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)的高表达体系,为建立结核菌特异性IFN-γElispot及流式诊断方法及其作用机制的研究奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv株DNA作为模板,用聚合酶链反应技术(PCR)扩增CFP-10及ESAT-6基因片段。分别插入原核表达载体,构建原核表达重组质粒pG-CFP10、pE-ESAT6。重组质粒分别经鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达含谷胱苷肽硫转移酶(GST)蛋白标签的rCFP10蛋白和带有聚组氨酸(His)蛋白标签的rESAT-10蛋白,亲和层析法纯化的蛋白产物通过Western-blot分析验证目的蛋白的抗原特异性及纯度。结果重组蛋白CFP-10以可溶性形式表达分子量34kD,目的蛋白浓0.5mg/ml,纯度84%;重组蛋白ESAT-6以包涵体形式表达,分子量26kD,目的蛋白纯化后的浓度为4mg/ml,纯度98%;Western blot证实其均具有良好的抗原性。通过大肠埃希菌BL21(DE3)与重组载体成功表达具有良好抗原性的CFP-10、ESAT-6重组蛋白。结论成功构建原核表达重组质粒,获得高纯度的CFP-10、ESAT-6重组蛋白。更多还原