ISG20基因在RASFs中的生物学功能研究

【作者】 郑志伟； 王林； 潘继红；

【机构】 济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院； 山东省医药生物技术研究中心； 山东省罕少见病重点实验室； 国家卫生部生物技术药物重点实验室；

【摘要】 目的:研究ISG20(Interferon-stimulated exonuclease gene 20)基因在类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞(RASFs)中的生物学功能。方法:采用转染ISG20 siRNA或ISG20基因的重组腺病毒载体调控RASFs中ISG20基因的表达,并采用RT-PCR法和Western blot法检测ISG20基因的表达水平。利用MTS法检测ISG20对RASFs细胞增殖能力的影响。体外管腔形成实验检测ISG20对RASFs血管形成能力的影响。流式细胞仪检测ISG20对RASFs细胞周期和细胞凋亡的影响。RT-PCR法检测ISG20对RA发病过程中关键的炎性因子IL-6,IL-10的影响。Transwell法检测ISG20对细胞迁移和细胞侵袭的影响。结果:RT-PCR结果显示:200μM ISG20 siRNA刺激RASFs 24小时后与NC相比在mRNA水平显著降低ISG20表达(P<0.05),0.8μg/ml ISG20基因的重组腺病毒载体可明显上调ISG20的表达(P<0.001),Western blot实验在蛋白水平验证了上述结果。MTS结果显示ISG20 siRNA与NC相比明显抑制细胞增殖(P<0.05),但ISG20重组腺病毒载体与对照相比,细胞增殖并无明显变化。体外管腔形成实验显示siRNA与NC相比可以抑制管腔形成数量,同时ISG20重组腺病毒载体与对照相比也表明ISG20具有促进管腔形成的作用。流式细胞仪检测结果显示NC组与silSG20组相比,细胞周期中S期和G2/M期细胞所占的比例增加,细胞凋亡比例明显增加(P<0.05,P<0.05)。RT-PCR结果显示NC组与silSG20组相比及ISG20重组腺病毒载体与对照相比,IL-6和IL-10的表达均显著上升(P<0.05,P<0.05)。Transwell法显示ISG20的表达差异对细胞迁移和侵袭的影响没有统计学意义。结论:ISG20在RASFs中具有促进细胞增殖、血管生成、细胞分裂和细胞凋亡,分泌炎性因子IL-6,IL-10的作用,但其对RASFs细胞迁移和侵袭能力没有影响。上述生物学过程均在RA进展和发病过程中具有重要意义,提示ISG20在类风湿关节炎中发挥重要作用。下一步,我们将对ISG20调控和参与上述生物学功能的具体机制进行更深入的研究。更多还原