姜黄素逆转HCT-8/5-Fu细胞凋亡抵抗的研究

【作者】 刘丁峰； 刘晓平；

【机构】 皖南医学院药学院；

【摘要】 目的探究姜黄素对HCT-8/5-Fu细胞的凋亡抵抗逆转作用的内部分子机制。方法正常培养的HCT-8、HCT-8/5-Fu细胞铺96孔板,加入1、4、16、64、256、1024、4096μg/ml浓度的5-Fu作用24小时,测5-Fu对HCT-8、HCT-8/5-Fu细胞的IC50;正常培养的HCT-8、HCT-8/5-Fu细胞同时提取总蛋白和核蛋白,用WesternBlot法测总蛋白中Nrf2、Keap1、Bax、Bc1-2、Aotin含量,核蛋白中Nrf2、Lamin B含量;正常培养的HCT-8、HCT-8/5-Fu细胞同时提取总RNA,用qPCR法测总RNA中Nff2、Keap1、Bax、Bcl-2、GAPDH的mRNA含量;正常培养的HCT-g/5-Fu细胞分为六组,空白组、姜黄素组(10μM)、5-Fu组(100μg/ml)、5-Fu(200μg/ml)、姜黄素+5-Fu组(101μM+100μg/ml)、姜黄素+5-Fu组(10μM+200μμg/ml),MTT法测得实验组各组的生存率,分别提取总蛋白、核蛋白、总RNA,用WesternBlot法测总蛋白中Nrf2、Keap1、Bax、Bcl-2、Actin含量,核蛋白中Nrf2、Lamin B含量,用qPCR法测总RNA中Nrf2、Keap1、Bax、Bc1-2、GAPDH的mRNA含量。结果5-Fu对HCT-8细胞和HCT-8/5-Fu的IC50分别是29.05μg/m1和720.8μg/ml,Western Blot法显示耐药细胞中Nrf2(总蛋白、核蛋白)、Bcl-2蛋白含量明显比不耐药细胞中的多,Keapl、Bax蛋白相反。qPCR法结果显示与Western Blot法结果一致。MTT实验,姜黄素组(10μM)存活率87.67%,5-Fu组(100μg/ml)存活率80.33%、5-Fu(200μg/ml)存活率76.56%、姜黄素+5-Fu组(10μM+100μg/ml)存活率50.25%、姜黄素+5-Fu(10μM+200μg/ml)组存活率41.86%;Western Blot法测得姜黄素组和姜黄素配合5-Fu组Nrf2(总蛋白、核蛋白)、Bcl-2蛋白含量最少,5-Fu组(200μg/ml)最多,Keap1、Bax蛋白相反。qPCR法结果显示与WesternBlot法结果一致。结论姜黄素能降低HCT-8/5-Fu细胞的凋亡抵抗情况,且与调控Nrf2通路有关。更多还原