猪Dectin-1簇受体的分子特征及在外周血白细胞群中的表达分析

【作者】 王省； 李坤； 魏国燕； 曹轶梅； 卢曾军； 刘在新；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所；

【摘要】 背景和目的:Dectin-1簇受体隶属于C型凝集素样受体(CLR)家族,研究发现Dectin-1簇受体在抗原交互递呈及靶向疫苗设计方面具有重要应用价值。目前,在人、鼠上已报道的Dectin-1簇受体成员包括CLEC1A、CLEC1B、CLEC7A、CLEC8A、CLEC9A、CLEC12A和CLEC12B。在猪Dectin-1簇受体成员中,仅有CLEC7A和CLEC8A的报道,尚未见其他成员的研究报道。因此,鉴定猪Dectin-1簇受体的分子特征以及在外周血白细胞中的表达情况,可为在兽医上靶向疫苗的研究提供理论基础。方法:采集猪静脉血,经红细胞裂解液处理后,收集白细胞,提取总RNA。使用OligodT随机引物进行逆转录,获得cDNA。根据GenBank预测的猪Dectin-1簇受体,设计特异引物,进行PCR扩增,连接T载体测序。对证实的猪Dectin-1受体进行3D结构模拟。取等量cDNA为模板使用qRT-PCR评估猪Dectin-1簇受体在外周血白细胞群体中表达情况。结果:本研究证实猪Dectin-1簇受体成员包括CLEC1A,CLEC1B,CLEC7A,CLEC8A,CLEC12A和CLEC12B。然而,存在于小鼠,牛和绵羊中的人CLEC9A的同源序列未在猪体内检测到,推测猪CLEC9A为假基因。本研究鉴定出的猪CLEC1A、CLEC8A、CLEC12A和CLEC12B变异体2的编码区分别为666bp、825bp、792bp、510bp,与预测序列一致,但其中存在少量核苷酸突变。猪CLEC1B编码区中缺失15个核苷酸,并且猪CLEC12B变异体1的"茎区"存在3个核苷酸插入。预测的猪CLEC7A基因编码6个变体,本研究中证实了3个主要变异体(A,B和D),首次报道606bp的变异体D。3D结构模拟指示:除CLEC1A和CLEC12B变异体2外,猪Dectin-1簇的成员中存在典型的C型凝集素结构域(CTLD)。静电势分析表明猪Dectin-1受体的N末端β1和β2区可能参与配体相互作用。qRT-PCR结果发现,在猪外周血白细胞中CLEC12A表达较高,而CLEC12B变异体1和2表达较低。结论:明确了猪Dectin-1簇受体中成员组成及其分子特征,为后续研究猪Dectin-1受体介导的抗原靶向递呈及靶向疫苗在兽医上进行研究奠定了基础。更多还原