基因Ⅰ型乙脑病毒EDⅢ结构域蛋白的原核表达及其抗体制备与鉴定

【作者】 于瑞明； 田占成； 独军政； 高闪电； 刘光远； 罗建勋； 殷宏；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所；

【摘要】 目的:本研究旨在进一步分析和验证作为JEV亚单位疫苗研制的主要候选抗原EDⅢ结构域的免疫原性及其所产生的抗体对病毒的抑制效果。方法:利用RT-PCR方法扩增基因Ⅰ型JEVGS株ED Ⅲ结构域基因,构建原核重组表达载体PET-30aED Ⅲ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,挑取阳性克隆进行诱导表达和纯化。将纯化的EDⅢ蛋白免疫兔体制备多克隆抗体,利用Western-blotting和间接免疫荧光实验验证制备的多克隆抗体与全病毒抗原的特异性反应,并通过噬斑减少中和试验(PRNT₅₀)测定了兔抗EDⅢ多克隆抗体的中和抗体效价。结果:结果表明,重组ED Ⅲ蛋白以包涵体的形式表达,并获得了较高纯度的ED Ⅲ蛋白,制备的兔抗ED Ⅲ多克隆抗体与全病毒抗原具有良好的特异性反应,用统计学软件SPSS计算中和抗体效价为133±46.2。结论:结果显示,基因Ⅰ型JEV GS株ED Ⅲ结构域具有良好的免疫原性,免疫动物所产生的抗体具有较高的中和抗体效价,因此ED Ⅲ结构域可作为JEV亚单位疫苗研制的候选抗原。更多还原