miR-7抑制RELA降低CD44表达减少乳腺癌干细胞的研究

【作者】 李淼； 尤承忠； 潘猛； 邱晟； 谢爱明； 窦骏；

【机构】 东南大学； 东南大学附属中大医院； 南京医科大学第一附属医院司法鉴定所；

【摘要】 研究背景:乳腺癌干细胞(BCSC)具有自我更新、无限增殖及多向分化的潜能,因此,靶向调控和治疗BCSC是逆转乳腺癌转移和复发的关键。跨膜糖蛋白CD44是BCSC表面标志之一,参与细胞增殖和迁移并与乳腺癌患者不良预后相关。RELA涉及细胞增殖及肿瘤发生和凋亡等。本研究前期发现miR-7在CD44~+CD24~-的BCSC中低表达,而过表达miR7可减少BCSC的CD44表达,但机制未明。研究目的:探讨miR-7调控RELA抑制CD44表达而减少BCSC亚群的分子机制,为靶向BCSC治疗乳腺癌提供依据。研究方法:1.q-PCR、FCM和Western blot检测过表达miR-7或下调RELA后3种人乳腺癌细胞系中相关分子表达。2.生物信息学预测相关分子结合靶基因位点,通过双荧光素酶报告基因和Chip-PCR实验加以验证。3.miR-7 agomir治疗NOD/SCID鼠原位移植瘤,分析瘤组织中BCSC亚群数量及分子表达差异。4.移植瘤蛋白芯片寻找miR-7调控新靶点。5.乳腺癌患者标本验证细胞系实验结果。研究结果:1.过表达miR-7或下调RELA后,3种人乳腺癌细胞系中RELA和CD44分子表达水平均明显降低,且BCSC的比例显著减少。2.双荧光素酶报告基因实验证实RELA确为miR-7的直接靶点,Chip-PCR实验验证RELA可直接结合至CD44启动子区。3.相较对照组,miR-7 agomir治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织中BCSC亚群数量显著减少,且miR-7分子表达量明显增加而RELA及CD44表达显著降低。4.移植瘤蛋白芯片显示内皮细胞选择性粘附分子ESAM在荷瘤组织中高表达,并受RELA调控。5.12例乳腺癌患者瘤组织中miR-7表达量较癌旁组织低,而RELA和CD44表达水平显著上调,与细胞系实验结果所证实的分子调控趋势相一致。结论:miR-7可通过靶向抑制RELA进而降低CD44的表达而减少BCSC亚群。更多还原