亚低温及缺营养/复营养对星形胶质细胞AQP4表达的影响

【作者】 周勇良； 任玥； 曾红； 张昆南；

【机构】 江西省人民医院神经内科； 江西省神经病学研究所；

【摘要】 目的 :观察缺营养/复营养对星形胶质细胞AQP4表达的影响及在亚低温实验条件下AQP4随相应时间点的表达规律,拟探讨神经系统疾病中脑水肿的发病机制,并阐明其细胞分子的发生机理,为临床脑水肿的治疗开辟新的策略。方法:1、直接荡摇分离培养、纯化和扩增星形胶质细胞;用免疫组化鉴定星形胶质细胞,将星形胶质细胞(AC)分为正常对照组(C)、缺营养/复营养组(L/R)、缺营养/复营养亚低温组(L/R+S)。用不含血清的培养基制作细胞常温缺营养模型,记录缺营养损伤时间,缺营养组时间分别为4h、8h、12h、16h、24h,对照组不作处理。采用台盼蓝染色法判断缺营养不同时间细胞活力状况。2、缺营养12小时后分别调节温度37℃及32℃,开始记复营养时间。每组设复营养4h、8h、12h、16h共4个时间点,建立缺营养/复营养常温组(L/R)、缺营养/复营养亚低温组(L/R+S)模型。用PCR分析AQP4的表达情况,免疫荧光染色观察AQP4表达情况。结果 :1、通过对原代星形胶质细胞的分离和纯化,第三代星形胶质细胞经GFAP免疫组化鉴定纯度在95%以上。2、常温下星形胶质细胞在缺营养12h后与对照组细胞活力比较(P<0.05),且在细胞复营养后保持其良好状态,能满足实验要求。3、取缺营养12h的细胞分别分为缺营养/复营养常温组(L/R)、缺营养/复营养亚低温组(L/R+S),每组设复营养4h、8h、12h、16h共4个时间点,PCR分析AQP4的表达情况,免疫荧光染色观察AQP4。且PCR表达量分析结果与对照组相比(P<0.05),常温组与亚低温组实验结果与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。4、免疫荧光结果显示亚低温组AQP4蛋白在复营养12h、16h其表达强度均低于相同时间点常温组结果。结论:星形胶质细胞在缺营养状态下随时间延长,其AQP4m RNA的表达下降,AQP4的免疫荧光灰度也下降。当星形胶质细胞在缺营养12h后恢复营养其AQP4的表达随相应时间点升高,而在亚低温实验条件下,AQP4的表达幅度较常温组更小,减轻了星形胶质细胞的水肿状态。故在脑水肿形成阶段时应用亚低温治疗及AQP4阻断剂,能够有效缓解脑水肿临床症状,为解除脑细胞缺血缺氧赢得时间。更多还原