小鼠EAE模型中病理和免疫指标的动态监测及杀伤性人工抗原提呈细胞的初步治疗

【作者】 万昕； 裴伟亚； 张一鸣； 张雷； Khawar Ali Shahzad； 许涛； 王伟； 沈传来；

【机构】 东南大学医学院病原生物学与免疫学系；

【摘要】 目的 :观察小鼠EAE病程中临床、病理及自身反应性CD4和CD8 T细胞等指标的动态变化规律;探索以聚乳酸-羟基乙酸微球(PLGA-MPs)为载体的杀伤性人工抗原提呈细胞(Ka APCs)对EAE的特异性免疫疗法。方法 :以MOG35-55多肽诱导构建C57BL/6鼠的EAE模型;临床神经功能评分评估病程;HE和IHC染色观察急性初发期、高峰期和慢性恢复期EAE小鼠脑和脊髓组织中炎性细胞浸润以及病理相关蛋白MBP和GFAP的表达;ELISPOT法和p MHC多聚体荧光染色及流式分析法检测不同病期中脾脏及淋巴结中MOG40-54表位特异性CD8 T细胞和MOG35-55表位特异性CD4 T细胞的反应活性和频率;在PLGA-MPs表面共包被2种靶抗原(H-2Db/MOG40-54二聚体,H-2I-Ab/MOG35-55多聚体)、3种负调节分子(anti-Fas m Ab,PD-L1-Ig,TGF-β1)以及抗吞噬分子CD47-Ig,制备MOG抗原特异性的多功能Ka APCs;经尾静脉注射Ka APCs治疗EAE,通过临床神经功能评分初步评价其疗效。结果:EAE模型鼠中,脑和脊髓组织中炎性细胞浸润程度随病情加重而增多,MBP随病情加重而表达降低,GFAP随病情加重而表达上升;MOG特异性CD4和CD8 T细胞在抗原肽刺激后分泌IFN-γ的反应活性在发病初期最高,随后逐渐下降,而其频率却在发病高峰期最高,以后缓慢下降;Ka APCs的输注治疗能显著减轻小鼠EAE的疾病程度,也明显减少脑和脊髓组织中炎性浸润,作用机制正在研究。结论 :中枢神经组织中炎性细胞的浸润程度和病理相关蛋白的表达水平与小鼠EAE的病程发展相一致,但自身反应性T细胞的数量与其对抗原刺激的反应活性有不同的动态变化规律。可生物降解的PLGA微球为载体的多动能Ka APCs有治疗EAE的潜能。更多还原