Sirtuin1上调c-FLIP表达介导ATL细胞抵抗Fas/FasL诱导的细胞凋亡

【作者】 岳浩迪； 杨静祎； 刘江涛； 王瑞婕； 王辉； 朱小飞；

【机构】 新乡医学院医学检验学院临床免疫教研室免疫研究中心；

【摘要】 研究背景:Fas/Fas L信号介导的细胞凋亡是调控T细胞免疫应答稳态和功能性的重要方式。当激活的效应T细胞完成清除病原体,通过Fas/Fas L介导细胞凋亡的方式促使激活的效应T细胞凋亡,而细胞凋亡抑制蛋白c-FLIP是阻止Fas/Fas L介导的生物学效应发生的重要因子。Sirtuin1是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖的去乙酰化酶,通过去乙酰化多种蛋白底物来阻断细胞衰老及凋亡,促进细胞增殖存活。成人T细胞白血病(ATL)是由人类T淋巴细胞病毒感染的恶性T淋巴细胞增殖性疾病,在ATL肿瘤细胞呈现出Fas/Fas L信号的抵抗作用,导致细胞的恶性增殖。目的:探讨sirtuin1抵抗Fas/Fas L诱导的细胞凋亡的分子机制,为临床ATL的预防及治疗提供实验数据及理论指导。方法:采用MTS法检测重组蛋白Fas L对Jurkat细胞和ATL细胞生长增殖影响;Western Blot、流式细胞法和RNAi技术,检测Sirt1表达水平对ATL细胞增殖、凋亡及抗凋亡蛋白表达的影响;通过荧光报告基因系统分析基因转录表达活性。结果:10ng/ml Fas L处理Jurkat细胞及ATL细胞,Jurkat细胞凋亡率达到60%以上,ATL细胞只在25%左右。与Jurkat细胞相比,ATL细胞中抗凋亡相关蛋白c-FLIP表达水平显著性增高。然而,当用SIRT1抑制剂Salermide 25μM处理细胞,ATL细胞的凋亡率明显增加。同时,siRNA实验显示,敲低SIRT1能显著性增加ATL细胞的凋亡率达到20%,而且c-FLIP蛋白的表达水平也明显降低。Tax质粒与c-FLIP荧光报告质粒共转染引起荧光信号明显增高,而同时转染Tax和SIRT1质粒,促进c-FLIP表达增高。结论:ATL细胞抵抗Fas/Fas L介导的细胞凋亡,是通过sirtuin1参与Tax介导c-FLIP的表达上调而引起的。SIRT1可能与Tax在c-FLIP的转录启动子区域形成复合物共同调控c-FLIP表达。更多还原