NGF介导的PI3K/AKT通路在2,5-己二酮致间充质干细胞来源神经样细胞凋亡中的作用研究

【作者】 李双月； 左恩俊； 朴丰源；

【机构】 大连医科大学公共卫生学院； 大连医科大学口腔医学院；

【摘要】 【目的】研究神经生长因子(NGF)介导的PI3K/AKT通路在2,5-己二酮(HD)致间充质干细胞来源的神经样细胞(MSC-NC)凋亡中的作用。【材料和方法】分离、纯化、扩增原代骨髓间充质干细胞,并诱导分化为神经样细胞。将MSC-NC分别暴露于10、20、40mM HD 24h后,Tunel染色检测凋亡,WB检测ATK、p-AKT、Bad、p-Bad、细胞质及线粒体内细胞色素C(Cyt C)水平,免疫共沉淀检测Bac/Bcl-XL复合物水平,JC-1染色检测线粒体膜电位,化学法检测Caspase-3活性,同时检测细胞内NGF基因、蛋白的表达。并分别向培养体系内添加NGF、PI3K抑制剂LY294002、PI3K激动剂IGF,检测NGF水平及ATK、p-AKT、Bad、p-Bad、Bac/Bcl-XL复合物、Cyt C、MMP水平及Caspase-3活性。【结果】HD呈剂量依赖性引起MSC-NC凋亡增多,细胞内NGF基因及蛋白水平下降,p-AKT、p-Bad蛋白水平降低,Bac/Bcl-XL复合物水平增加,MMP下降,线粒体Cyt C释放,Caspase-3活性增加;NGF及IGF使得HD暴露导致的上述改变逆转,LY294002促进HD暴露导致的上述改变发生。【结论】HD暴露通过NGF介导的PI3K/AKT通路引起MSC-NC发生凋亡。更多还原