组蛋白脱乙酰酶抑制剂曲古抑菌素A经诱导自噬减轻蛛网膜下腔出血后神经元凋亡

【作者】 邵安文； 吴海建； 董啸； 洪远； 陈盛； 赵明飞； 张建民；

【机构】 浙江大学医学院附属第二医院神经外科；

【摘要】 目的:曲古抑菌素A是一种组蛋白脱乙酰酶抑制剂,具有广泛的神经保护作用。本实验旨在研究曲古抑菌素A是否能够通过增强自噬从而减轻神经元凋亡,进而缓解蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤。方法:通过血管内穿刺法建立大鼠蛛网膜下腔出血后模型,在造模后24小时评估死亡率,神经功能评分,脑水肿含量。经Western blot方法定量检测乙酰化组蛋白H3,微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ),微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ),Beclin-1,Bax和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)的蛋白表达水平。经免疫荧光方法观察Beclin-1与神经元的共定位情况。通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)与神经元核抗原(NEUronal Nuclei,NeuN)共染观察凋亡的神经元变化情况。使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA))调控自噬从而观察凋亡变化。结果:在蛛网膜下腔出血后24小时,曲古抑菌素A能够显著减少大鼠脑水肿和神经功能损伤。同时曲古抑菌素A增加了乙酰化组蛋白H3,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率和Beclin-1的蛋白表达水平,并显著抑制凋亡相关蛋白Bax和caspase 3的蛋白表达量。我们还发现,自噬相关蛋白Beclin-1和TUNEL阳性细胞大多与神经元共定位,曲古抑菌素A能显著抑制损伤侧皮层神经元凋亡。相反的,使用3-MA明显抑制了曲古抑菌素的神经保护作用。结论:使用曲古抑菌素A治疗大鼠蛛网膜下腔出血能够通过刺激自噬从而缓解神经元凋亡和提高神经功能。更多还原