氯丙醇类化合物对T淋巴细胞的毒性及机制研究

【作者】 卢静； 关爽； 张爽； 许琳莉； 黄国任； 宋博翠； 王振宁； 张硕男； 邓旭明；

【机构】 动物医学学院吉林大学；

【摘要】 【目的】氯丙醇类化合物是目前被国际上广为关注的食品污染物,包括3-氯-1,2-丙二醇（3-MCPD）、1,3-二氯-2-丙醇（1,3-DCP）、2,3-二氯-丙醇（2,3-DCP）等,其中3-MCPD含量最大。据报道3-MCPD具有免疫抑制作用,能降低CD4+CD8+T细胞比值,但其机制不清楚,2,3-DCP对免疫系统毒作用未见报道;T淋巴细胞是数量最多的淋巴细胞,具有重要的免疫功能。因此,本研究旨在阐明3-MCPD（+）、和2,3-DCP对小鼠T淋巴细胞免疫毒性及机制。【方法】在体外实验中,采用MTT法考察受试物对小鼠脾淋巴细胞的细胞毒作用,在非细胞方法毒性剂量下采用流式细胞术分析、ELISA试剂盒检测、RT-PCR、细胞内钙离子的荧光测定、western blot等技术考察受试物对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖、细胞周期、T细胞表面标志、细胞因子、细胞内钙离子浓度、CD3 T细胞pIκBα、IκB、NF-κB、NFAT2、AP-1等蛋白表达的影响;在体内实验中,构建二硝基氟苯（DNFB）所致的迟发型超敏反应（DTH）小鼠模型,考察了受试物对二硝基氟苯（DNFB）诱导的迟发型超敏反应（DTH）的影响。【结果】体外实验确定3-MCPD（+）、和2,3-DCP的非细胞毒性剂量范围为1-4mM,该剂量范围内的3-MCPD（+）和2,3-DCP剂量依赖地抑制T细胞的免疫功能。其中3-MCPD（+）（1,2,4mM）剂量依赖地抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖、降低CD4⁺T淋巴细胞的数量和CD4⁺/CD8⁺T细胞比值、阻止T淋巴细胞进入到S期、抑制Th1和Th2细胞因子分泌和IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-6基因表达、抑制细胞内Ca²⁺浓度和钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）及P-CaMKⅡ蛋白表达、并抑制P-IκB、NFAT2和AP-1蛋白表达、促进Iκ3蛋白表达,但对CD8⁺T淋巴细胞数量无明显影响;2,3-DCP（1,2,4mM）剂量依赖地抑制ConA诱导的脾淋巴细胞增殖,并使S期细胞比例增多,降低CD4+T细胞比例和CD4+/CD8+比值,降低细胞分泌Th1细胞因子,并在剂量为4mM时降低细胞分泌Th2细胞因子,抑制NFAT2、pIκBα和p65 NF-κB蛋白表达,促进IκB蛋白表达;体内实验表明3-MCPD（+）（10,20,40mg/kg）和2,3-DCP（10,20,40mg/kg）降低DTH诱导迟发型超敏反应小鼠耳廓重量、耳组织的水肿和炎性细胞浸润。【结论】3-MCPD（+）和2,3-DCP对BALB/c小鼠T淋巴细胞具有免疫抑制作用,这种抑制作用可能是通过抑制Ca²⁺、NF-κB、NFAT及AP-1信号通路来实现的。该研究为3-MCPD（+）和2,3-DCP对T淋巴细胞的免疫抑制机制和进一步的安全性评价提供毒理学依据。更多还原