GDF9基因的克隆及其在高低产新西兰白兔的差异表达

【作者】 孙彩霞； 黄涛； 汪丹； 张伟； 王安思； 李明；

【机构】 河南农业大学；

【摘要】 为了研究GDF9基因对新西兰白兔繁殖性状的影响,试验选取性成熟经产母兔,分高产和低产两组,每组随机选取5只。采集每只母兔的心、肝、脾、肺、肾、卵巢和子宫共7种组织,提取每种组织的DNA和RNA,反转录得到每种组织的cDNA序列。利用NCBI、Primer 5.0设计3对引物克隆了GDF9基因的全长DNA序列和cDNA序列,最后采用实时荧光定量PCR的方法构建GDF9基因的组织表达谱,研究其在高、低产母兔7种不同组织上的表达规律,实验采用5次生物学重复,以GAPDH基因为内参基因,采用2^-△△CT的方法进行定量分析。结果表明:（1）新西兰白兔GDF9基因的DNA和mRNA序列全长分别为2515bp和1359bp,基因共有两个外显子和一个内含子,长度分别是39Tbp,962bp和1156 bp。与人、绵羊、大鼠、小鼠的氨基酸相似性分别为72%、68%、66%、66%。（2）通过比对低产和高产新西兰白兔测得的mRNA序列,发现在GDF9基因外显子2上存在3个潜在突变位点分别是C539T,G562C和C718G,这3个潜在突变导致其对应氨基酸的改变分别是Thr180Met,Glu188Gln,Leu240Val。（3）GDF9基因的组织表达谱分析结果表明该基因在所采集的7个不同组织上均有表达,无组织特异性;无论在高产还是低产组中,GDF9基因在卵巢中的表达量均最高,肝脏次之,心脏和脾脏的表达量最低;与高产组相比,低产组的GDF9基因在肝脏和子宫里的表达量上调显著（P<0.01）,心脏、脾脏和卵巢组织的表达量也显著上调（P<0.05）,但在肺脏和肾脏组织中,GDF9基因在高产和低产组间的表达差异不显著（P>0.05）。由此我们推测,GDF9基因外显子2上的3个新的突变位点可能可以作为提高新西兰白兔产子数的基因标记,而GDF9基因在高、低产新西兰白兔不同组织中表达量的变化趋势,表明GDF9基因在兔上的表达并不仅限于卵巢,可能对其他器官也具有某种作用。更多还原