应用i-TRAQ/HPLC-MS筛选奶牛脂肪肝病尿液生物标志物

【作者】 孙雨航； 夏成； 徐闯；

【机构】 黑龙江八一农垦大学；

【摘要】 目的利用同位素标记相对和绝对定量技术(i-TRAQ)筛选并鉴定健康奶牛与患脂肪肝病奶牛尿液中差异表达的蛋白,为早期诊断奶牛脂肪肝病提供生物标志物。材料和方法分别收集健康奶牛和患脂肪肝病奶牛各10头的尿液,分为两组:健康组和脂肪肝病组。组内等量混合后利用高效液相色谱去除高丰度蛋白,样本经试剂标记后利用二维色谱分离,经串联质谱鉴定。结果根据原始蛋白数据结果,在脂肪肝病组奶牛中共筛选出差异表达蛋白110个,其中50个表达下调、60个表达上调。通过生物学分析:GO(基因功能)分析、Pathway(信号通路)分析以及Network(基因网络)分析,筛选出4种关键蛋白,分别为表达上调的Vitronection(VTN玻连蛋白)、表达下调的Neutrophil gelatinase-associated lipocatin(NGAL中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白)、Prothrombin(F2凝血酶原)和Clusterin(CLU丛集素)。讨论和结论运用i-TRAQ/HPLC-MS技术可有效的筛选出脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,并且首次获得4种与脂肪肝病密切相关的关键性调节因子,分析结果表明F2和CLU与脂肪肝病关系更密切,作用机制更直接明了,可以排除许多干扰因素和额外影响,可成为诊断奶牛脂肪肝病的重要生物标志物,将为奶牛脂肪肝病的早期监测和诊断提供新的依据和方法学基础。更多还原