玻璃化冷冻小鼠MⅡ卵母细胞对其体外受精囊胚印记基因甲基化的影响

【作者】 程柯仁； 傅祥伟； 朱士恩；

【机构】 中国农业大学动物科技学院农业部动物遗传育种与繁殖重点实验室畜禽育种国家工程实验室；

【摘要】 引言/目的玻璃化冷冻卵母细胞是辅助生殖技术的重要环节。本实验旨在探讨玻璃化冷冻小鼠减数分裂中期Ⅱ(MetaphaseⅡstage,MⅡ)卵母细胞对其体外受精后囊胚的印记基因差异甲基化区域DNA甲基化状态及移植后胚胎发育的影响。材料方法雌性昆明白小鼠超数排卵后,采用OPS法冷冻小鼠MⅡ卵母细胞,对照组为新鲜卵母细胞。体外受精后获得囊胚,提取囊胚基因组DNA,再经亚硫酸盐变性处理,使非甲基化的C碱基变为U碱基,而甲基化的C碱基保持不变,然后经克隆测序分析H19、Snrpn、Peg3差异甲基化区域的甲基化状态。同时,将胚胎移植到假孕母鼠体内,植入后取13.5dpc的胎儿和胎盘称重。结果(1)对照组H19、Snrpn、Peg3差异甲基化区域甲基化的CpG比例均显著高于实验组;(2)对植入后胎儿和胎盘和对照组比较分析,冷冻组获得的胎儿重量与对照组无显著差异,而胎盘重量显著高于对照组。讨论研究结果显示小鼠MⅡ卵母细胞玻璃化冷冻会造成囊胚基因组DNA中H19、snrpn、Peg3差异甲基化区域的甲基化丢失,其原因可能是冷冻造成DNA甲基化转移酶表达量的改变,使得细胞在分裂的过程中没有忠实地维持DNA甲基化模式;此外,冷冻卵母细胞使H19等印记基因差异甲基化区域甲基化水平降低,导致调控胎盘发育的基因表达量上调,从而造成植入后孕体胎盘变重。但不会对胎儿体重造成影响,在胎儿组织细胞中印记机制的维持不易受到外界因素的影响。更多还原