两种不同来源的卵转铁蛋白N-糖组结构的质谱分析及比较

【作者】 姜宽； 王承健； 孙玉姣； 刘洋； 王仲孚； 黄琳娟；

【机构】 西北大学生命科学学院,西部资源生物与生物技术教育部重点实验室；

【摘要】 卵转铁蛋白(ovotransferTin)是一种存在于鸟类卵清中的N-糖基化蛋白,含量约占卵清总蛋白的12%-13%,具有抗菌、抗病毒、防霉、抗癌及抗氧化等多种活性[1]。有研究表明,不同鸟类的卵转铁蛋白氨基酸序列完全一致,它们一级结构间的差异仅存在于与蛋白连接的N-糖链[2]。由于糖蛋白的各种生物学功能与其糖链部分密不可分[3],因此,对不同来源的卵转铁蛋白N-糖链进行结构分析和定量比较,对于其结构和生物学功能之间的相互关系研究具有重要指导意义。我们用乙醇分级沉淀法分别从家鸡和野鸡的卵清中提纯卵转铁蛋白,以PNGase F释放其N-糖链,采用糖链的苯胺稳定同位素标记法联合ESI-MS、HILIC-MS及MS/MS等分析手段,分离并鉴定了家鸡和野鸡卵转铁蛋白N-糖链的各种同分异构体,定性定量比较了这两种不同来源的卵转铁蛋白的各种N-糖链在结构和丰度上的差异。分析结果表明,家鸡卵转铁蛋白具有16种不同序列结构的N-糖链,包括1种核心五糖结构(3.18%)、12种复杂型(91.40%)及3种杂合型(5.42%);野鸡卵转铁蛋白共有21种不同序列结构的N-糖链,包括]种切端结构(1.88%)、1种核心五糖结构(6.26%)、3种高甘露糖型(5.20%)、10种复杂型(67.52%)及6种杂合型(19.14%)。两种蛋白所有N-糖链均为中性糖,无岩藻糖基化或唾液酸化的糖链。共有10种不同序列结构的N-糖链同时存在于家鸡和野鸡卵转铁蛋白中,两种糖蛋白上具有相同序列的N-糖链之间在相对丰度(摩尔比)上具有显著差异(图1)。本研究为今后深入探索卵转铁蛋白糖基化与其生物学功能之间的相互关系以及分析不同卵转铁蛋白的功能差异提供了参考依据。更多还原