热葡糖苷酶芽孢杆菌D型海因酶基因的克隆与表达

【作者】 唐玮； 黄鹤； 陶荣盛； 蒋宇； 姜卫红； 杨晟；

【机构】 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所； 中国科学院合成生物学重点实验室； 中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心； 上海工业生物技术研发中心；

【摘要】 D-海因酶(EC3.5.2.2,简称DHase)是海因法制备D-氨基酸的关键酶,在生产上,需要高比活和高稳定性的D-海因酶,以降低D-氨基酸生产中的酶成本。来源于热葡糖苷芽孢杆菌的D-海因酶具有高比活和耐高温的性质,我们利用染色体步移的方法从野生型热葡糖苷芽孢杆菌中得到海因酶的ORF编码序列,然后将该序列和改造后的序列克隆到三种不同的表达载体pTrc99A、pTrcHisA和pKK223-3中,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效液相色谱检测蛋白表达情况和酶活,结果表明野生型基因的蛋白表达量低于改造基因,但是比活无明显差别。锰二价离子对该海因酶具有较强的激活作用,通过加入氯化锰后酶活提高了近l0倍。更多还原