SVCV/M蛋白单克隆抗体的制备

【作者】 李泽明； 张琪； 罗培骁； 刘广鑫； 王敏； 刘学芹；

【机构】 华中农业大学水产学院水产动物医学系； 农业部淡水生物繁育重点实验室； 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心；

【摘要】 本实验首先针对鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)基质蛋白M核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR扩增M基因,将该基因连接到原核表达载体p GEX-KG,获得重组质粒KG-SVCV/M。将重组质粒转化感受态细胞BL21,经IPTG诱导后,表达了与预期大小相符的约50KDa的融合蛋白。以纯化的该蛋白为免疫原,注射免疫4周龄BALB/c雌鼠(每次30ug,每次间隔2周)。3次免疫后,待血清效价较高时,取小鼠脾脏细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞通过细胞融合技术获得杂交瘤细胞。进一步筛选、纯化,获得能单一产生针对SVCV/M蛋白抗体的杂交瘤细胞株。通过间接免疫荧光、免疫印记、酶联免疫吸附反应等实验,对该单克隆抗体的生物学活性进行检测。结果显示,单克隆抗体5A1株,能够特异性识别SVCV/M蛋白;为进一步探究该抗体的识别位点,我们将M基因分成四段进行原核表达(1-186bp,169-354bp,337-522bp,505-672bp),通过免疫印记实验进行了验证。结果显示,单克隆抗体5A1株,可以特异性识别M基因337-522bp序列。本研究成功获得了特异性识别M蛋白的单克隆抗体,为研究SVCV的致病机制奠定了良好的基础。更多还原