石房蛤毒素(STX)适配体的鉴定与优化

【作者】 郑欣； 胡波； 高顺祥； 刘德婧； 孙铭娟； 焦炳华； 王梁华；

【机构】 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室；

【摘要】 2013年美国FDA的科学家在Toxicon上报道了通过SELEX筛选出了特异结合石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)的适配体(apt)。本工作利用的STX ELISA试剂盒(Abraxis LLC,产品编号:52255B),在优化的apt与STX结合缓冲液中分析apt与STX结合。结果分现,apt与试剂盒中的标准STX(游离的)和酶标的STX都能特异结合(图1A、B),并呈剂量依赖关系(图1B)。apt能阻断STX的溶红细胞作用,还能抑制STX对藜芦定和哇巴因激活的钠离子通道阻断作用(图2),以及延长STX对小鼠的毒性等。由此验证了所报道适配体与STX的特异结合。利用生物膜干涉技术测定亲和常数(Kd),发现apt的Kd值为7.44μmol/L(图3),通过优化apt的序列和结构,一条预测能形成G四联体的序列Kd值为128nmol/L。由此得到了一条与STX亲和力提高了40倍的新适配体。更多还原