EgM9、EgM123蛋白免疫犬抗体检测与免疫组织化学研究

【作者】 张壮志； 赵莉； 阿帕克孜·麦麦提； 杨帆； 张旭； 赵璐； 色力克·吾布力哈生木； 王俊伟； 石保新；

【机构】 新疆畜牧科学院兽医研究所； 新疆生产建设兵团畜牧兽医草原工作总站；

【摘要】 目的 :对Eg M9、Eg M123两种蛋白免疫犬后0~27周相关血清抗体、小肠组织及肠系膜淋巴结抗体靶位点分布情况进行了检测,旨在了解免疫后两种抗体的持续变化情况,为终末宿主免疫预防研究提供试验依据。方法:实验犬分为三组,分别用Eg M9蛋白、Eg M123蛋白及PBS进行免疫,免疫三次,每次免疫间隔2周,第5周经口服感染源头蚴,0~27周之间定期采血,用ELISA检测法检测血清抗体效价及血清中淋巴因子含量。采用免疫组织化学技术分别对三组犬肠系膜淋巴结及小肠组织进行Ig G抗体靶位点检测。结果 :ELISA检测中,三免后一周抗体水平达到最高,攻击原头蚴后,抗体水平随之下降,免疫时间达到16周,免疫组抗体与对照组的差异不显著(P>0.05)。第5周时各组血清中IFN-γ的含量均达到最高,之后呈现下降趋势;第5周后PBS组血清中IL10含量显著高于Eg M9蛋白免疫组及Eg M123蛋白免疫组(P<0.05)。第27周PBS组血浆中IFN-γ含量低于Eg M9蛋白免疫组及Eg M123蛋白免疫组(P<0.05);各组血浆中IL4含量差异不显著(P>0.05)。免疫组化试验中,四个实验组都存在Ig G抗体靶位点,进一步进行三步法,标准阳性样呈现棕色,反应强阳性,27周的肠系膜淋巴结及小肠组织样品Eg M9和Eg M123弱阳性,PBS组免疫组化反应阴性;三步法可以定位检测免疫犬肠系膜淋巴结和小肠上的Ig G靶位点抗体富集程度。结论 :随着免疫持续期延长,Eg M家族蛋白免疫犬血清抗体水平呈现下降趋势,肠系膜淋巴结和小肠组织特异性抗体也随之减少,故免疫组化反应明显降低。这为今后开展免疫持续期试验提供了基础定位依据,也为包虫病终末宿主疫苗研制积累了相关试验经验。更多还原