肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

【作者】 吕雪莲； 周薇； 刘松艳； 曹俊； 张童利； 王曼宇； 刘思国； 于申业；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室； 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院；

【摘要】 目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。方法 :本实验利用改进的Red同源重组系统成功构建SPI-1、SPI-2、SPI-3三种主要毒力岛的单缺失、双缺失及三缺失菌株。结果 :敲除SPI-1后的单缺失、双缺失和三缺失菌株的侵袭力均下降,而其他缺失菌株和野生菌株相比侵袭能力差别不大;所有缺失株对细胞的粘附力均显著低于野生菌株(P<0.001)。将上述毒力岛缺失株分别接种7日龄SPF鸡,评价缺失株的致病力、定殖能力以及对鸡只的免疫效力。结果表明,毒力岛缺失菌株可以在肝脏、脾脏和盲肠中定殖,但不会引起鸡只发病,且SM6ΔSPI-1-3在脾脏和肝脏中的定殖效率低于SM6,接种第8天即被机体迅速清除;毒力岛缺失菌株产生的抗体均处于较高水平;毒力岛缺失菌株免疫后机体CD4+T和CD8+T亚群的均有明显变化。免疫后检测血清中IL-4和IFN-γ的细胞因子水平也有上升趋势,并且病理学结果表明鸡只无明显的病理改变。结论 :毒力岛缺失菌株中SM6ΔSPI-1-3有较好的免疫效果及保护效率。三种主要毒力岛缺失菌株的成功构建为阐明肠炎沙门氏菌致病机制和研发安全有效的减毒活疫苗载体奠定了良好的基础。更多还原