1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)的siRNA对人涎腺导管细胞HSG的作用

【作者】 庞春艳； 王永福；

【机构】 包头医学院第一附属医院风湿免疫研究所； 内蒙古自治区自体免疫学重点实验室；

【摘要】 目的:构建靶向S1P1基因的siRNA慢病毒表达载体,感染人涎腺导管细胞HSG,探讨S1P1的siRNA治疗干燥综合征(SS)的可能性。方法:实验分对照组、空载体组、S1P1-scramble-siRNA组及S1P1-siRNA组,分别将pLL3.7空载体和构建成功的慢病毒表达载体与pMD2.G、pMDLg/pRRE、pRSV-REV共转染293T细胞制备病毒,感染HSG细胞株48h,流式细胞术检测其感染效率,实时荧光定量RT-PCR法检测HSG细胞中S1P1mRNA的表达水平;细胞免疫化学法检测细胞中S1P1蛋白的表达水平;ELISA法检测细胞上清中干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-17(IL-17)的表达水平。结果:1.成功构建S1P1-scramble-siRNA、S1P1-siRNA慢病毒表达载体,慢病毒的滴度约为3.5×108TU/mL。2.感染48h后S1P1-siRNA组HSG细胞中S1P1mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组、空载体组和S1P1-scramble-siRNA组(P<0.05),对照组;3.S1P1-siRNA组HSG细胞分泌的IL-17的浓度明显降低,较对照组、空载体组和S1P1-scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.05);4.S1P1-siRNA组细胞上清中IFN-γ的浓度降低,与对照组、空载体组和S1P1-scramble-siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建靶向S1P1基因的慢病毒载体,S1P1-siRNA可以使S1P1mRNA和蛋白表达水平下降,同时抑制细胞上清中IL-17和IFN-γ的表达,说明S1P1-siRNA可稳定感染HSG细胞且特异高效地抑制S1P1基因的表达,抑制上清中细胞因子的表达,为治疗SS奠定了实验基础。更多还原