siRNA特异性沉默TLR4基因对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响以及机制的初步研究

【作者】 李涛； 刘亚婷； 徐恩君； 徐元宏； 周敏；

【机构】 安徽医科大学第一附属医院；

【摘要】 目的 :探讨si RNA特异性沉默肝癌细胞株TLR4基因后对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响。方法 :合成TLR4特异性的si RNA 3对,随机si RNA阴性对照1对,FAM标记的si RNA阴性对照1对;取适量的FAM标记的si RNA和Lipo2000,使si RNA:Lipo2000的比例为0.5:1、1:1、1.5:1、2:1、2.5:1转染入Hep G2细胞,筛选出最佳的转染条件;将合成好的si RNA分别转入人肝癌细胞株Hep G2,运用RT-PCR和Western blot方法筛选出具有最佳沉默效率的si RNA;用具有最佳沉默效率的TLR4 si RNA转染Hep G2,MTT检测转染前后细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测转染前后细胞凋亡能力的变化;以Western blot法检测转染前后TLR4下游通路相关蛋白的表达。结果 :用荧光显微镜观察,si RNA:lipo2000比例为1:1时转染效率最高,可达到(90.48±1.27)%;经RT-PCR和Western blot法分析转染前后的TLR4表达含量,TLR4-si RNA-1和TLR4-si RNA-3均发挥TLR4基因沉默效应,TLR4-si RNA 1具有最佳的沉默效率;用具有最佳沉默效率的si RNA-1进行后续实验,将TLR4-si RNA-1转染入Hep G2细胞,MTT检测发现TLR4基因沉默后Hep G2细胞的增殖能力减低,流式检测发现细胞凋亡增加;Western blot检测发现TLR4基因沉默后,其下游的蛋白My D88,TRIF,IRF3,IκBα,JNK和ERK表达量减低,而NF-κB和p-IκBα的表达量增高。结论 :TLR4-si RNA-1沉默TLR4后,很可能通过抑制ERK和JNK途径和激活NF-κB途径来抑制人肝癌细胞株Hep G2的增殖能力和促进Hep G2细胞的凋亡能力。更多还原