人记忆性CD4~+ T细胞高表达转录因子T-bet参与调控细胞因子IFN-γ的快速产生

【作者】 余思菲； 张燕楠； 杨滨燕； 吴长有；

【机构】 中山大学中山医学院免疫研究所；

【摘要】 记忆性CD4⁺ T细胞是适应性免疫应答的主要参与细胞,其主要特征是当再次遇见相同的特异性抗原刺激时,可以快速地产生大量的细胞因子并发挥有效的免疫应答作用。然而,关于人的记忆性CD4⁺ T细胞的调控机制还不是很明确。通过体外不刺激或刺激细胞,分析Th1细胞相关转录因子的表达与细胞因子的产生之间的关系,从转录因子方面探讨人记忆性CD4⁺ T细胞快速产生细胞因子的机制。抗CD3和抗CD28或佛波酯和离子霉素分别刺激纯化的记忆性（CD45RO+CD45RA）和初始性（CD45RO-CD45RA⁺）CD4⁺ T细胞,用流式细胞术（FACS）和酶联免疫吸附法（ELISA）分析细胞因子的产生,用FACS、PCR和Western Blotting（WB）法分析未刺激或刺激后记忆性或初始性细胞中转录因子与细胞因子的表达,同时用FACS法分析中央型/效应型记忆性、效应性和初始性CD4+T细胞中IFN-γ和T-bet的表达以及T-bet⁺CD4⁺ T细胞的表面分子,WB法分析T-bet在记忆性CD4⁺ T细胞胞浆或胞核中的表达。FACS和ELISA结果显示记忆性CD4⁺ T细胞在刺激早期便可快速产生大量细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2,FACS和WB分析发现静息状态下的记忆性CD4⁺ T细胞高表达T-bet（42.17±3.04）,初始性CD4⁺ T细胞不表达或低表达T-bet（2.18±0.41）,同时发现IFN-γ与T-bet之间有明显的共表达关系。用多色流式细胞术检测发现T-bet在效应型记忆性CD4⁺ T细胞(CD45RA^lowCD62L^lowCCR7^low)中表达最高,其次是中央型记忆性CD4⁺ T细胞(CD45RA^lowCD62L^highCCR7^high),同时IFN-γ在两群记忆性CD4⁺ T细胞中均高表达。pSTAT-1和pSTAT-4的表达在记忆性和初始性CD4⁺ T细胞中的表达没有明显的差异性。用抗CD3和抗CD28分别活化不同时间点后比较分析T-bet、pSTAT-1和pSTAT-4在记忆性和初始性CD4+T细胞中的表达,FACS和WB结果显示活化早期（<6小时）T-bet的表达在记忆性和初始性CD4⁺ T细胞有明显的统计学差异性。进一步分析发现T-bet在记忆性CD4⁺ T细胞的胞核中明显高表达,PCR结果显示未刺激时没有IFN-γmRNA的表达。综上所述,胞核中预表达的T-bet可能参与调控IFN-γ等细胞因子的快速表达。本研究主要从转录因子水平阐述了调控记忆性CD4⁺ T细胞发挥快速有效的免疫应答的可能机制,为新型疫苗的研制提供理论基础,为抗肿瘤和慢性炎症的治疗和愈后评估提供了参考依据。更多还原