AFP基因修饰DC细胞分泌exosome的抗肿瘤作用

【作者】 黄胜兰； 林万松； 黄传钟； 陈淑萍； 李洁羽； 叶韵斌；

【机构】 福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室 福建省肿瘤转化医学重点实验室；

【摘要】 背景:细胞免疫疗法在肝癌的治疗中起着越来越重要作用,其中,树突状细胞(Dendritic cell,DC)疫苗的研究与应用已取得很大的进展,然而在实际应用中DC疫苗的治疗仍存在很多不足,主要是抗原有效递呈和激活T细胞的能力有限,肿瘤抗原基因转染的DC疫苗已开始应用于临床实践,但基因载体的安全性还有待评价。Exosome是DC细胞分泌一种膜性微囊结构,其重要特性是携带来源细胞的各种功能蛋白,可作为非细胞疫苗应用。目的:探索慢病毒为载体的AFP基因感染的DC细胞分泌exosome的能力,以及exosome在抗肝癌治疗中的作用。方法:构建能使AFP稳定表达的重组慢病毒颗粒。分别用AFP肽、反复冻融HepG2细胞全抗原、AFP重组慢病毒颗粒负载DC,制备DC疫苗。并用超滤密度梯度离心法提取纯化DC分泌的exosome,透射电镜下观察形态,western blot分析其功能相关分子。WST-1法检测exosome疫苗刺激T淋巴细胞增殖情况,以及诱导的CTL对HepG2的细胞毒效应,ELLSA法检测T淋巴细胞培养上清中分泌INF-γ的浓度。结果:成功构建的慢病毒表达载体PRV3-AFP,能高效感染树突状细胞,并促进其递呈AFP抗原。诱导培养的mDC具典型的树突状细胞结构,表面HLA-DR、CD80、CD83、CD86、CD1a分子的表达明显高于imDC。慢病毒感染成熟DC分泌的exosome在电镜下为直径在50nm-100nm之间圆形或椭圆形小体,内含与DC功能相关的分子:ICAM-1、HLA-DR、CD86分子。exosome疫苗刺激T淋巴细胞增殖能力和诱导的T细胞对HepG2细胞的杀伤能力强于DC疫苗(P<0.05),同时在DC存在时exosome能更有效的刺激T淋巴细胞增殖和产生细胞毒作用。结论:DC细胞分泌的exosome作为一种具有抗原提呈能力的亚细胞结构,可诱导外周血中T细胞增殖并发挥特异性抗肿瘤作用。有望取代DC而成为新型的非细胞性HCC疫苗。更多还原