环氧二十碳三烯酸在非酒精性脂肪性肝炎中的作用及机制研究

【作者】 王晓晶； 李兰； 王洪武； Jianing Luo； 肖芳； Todd Harris； Kin Sing Stephen Lee； Bruce Hammock； 罗小平； 宁琴；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科； Faculty of Artsand Science,University of Toronto； Department of Entomology and UC Davis Comprehensive Cancer Center,University of California； 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科；

【摘要】 目的:非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是非酒精性脂肪肝较为严重的一种形式,可进展为终末期肝病和肝癌。环氧二十碳三烯酸(EETs)是细胞色素P450表氧化酶的代谢产物,研究发现其有抗炎活性。本研究拟探讨EETs在蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的脂肪性肝炎小鼠中的作用及相关机制。方法:通过喂食C57BL/6小鼠蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食6周,建立非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠模型。通过加入sEH抑制剂TPPU进行干预后,检测各时间点肝脏内EETs含量,肝功能(ALT/AST),肝脏及外周血脂含量(TC/TG),炎性因子(TNF-α、IL-1、IL-6)和趋化因子(MCP-1、IL-8)的表达水平;观察小鼠肝脏组织病理损伤及脂肪变性程度;测定肝脏内PPARα、ICAM-1、VCAM-1等炎性相关分子mRNA表达情况;免疫组化技术检测MCD饮食组、MCS饮食组及MCD+TPPU干预组小鼠肝脏组织中NF-κB的表达活化情况。体外建立HepG2细胞与THP-1细胞共培养体系,通过游离脂肪酸(油酸及棕榈酸)刺激及4种EET同分异构体分别干预后,ELISA检测细胞上清炎性因子及趋化因子水平的变化。激光共聚焦观察巨噬细胞内NF-κB活化情况。结果:TPPU干预后,小鼠肝脏内EETs含量显著增加,肝细胞损伤和炎性细胞浸润的情况得到明显改善,肝功能及肝内甘油三酯水平显著降低,肝脏及血清内促炎细胞因子(TNF-α,IL-1,IL-6)以及趋化因子(IL-8,MCP-1)水平均有所下降。肝脏内炎症相关粘附分子(ICAM-1,VCAM-1)tuRNA表达水平下调,而抗炎过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)mRNA表达升高,肝脏组织中NF-κB的表达明显减弱。在HepG2和THP-1细胞共培养体系中11,12-EET能显著降低FFA刺激引起的TNF-α,MCP-1和IL-1β的释放。5,6-EET和8,9-EET也可一定程度抑制TNF-α和IL-1β的释放,但效果较弱,而14,15-EET几乎没有抑制作用。激光共聚焦观察发现,巨噬细胞经FFA刺激后NF-κB入核明显增加,而11,12-EET的干预可抑制该现象。结论:EETs可部分通过阻断NF-kB通路,抑制巨噬细胞的炎性功能,从而在NASH发生发展过程中减少肝脏的炎性损伤,对肝脏起到保护作用。更多还原