超声破坏微泡对重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α活性的影响

【作者】 李巧； 王志刚； 冉海涛； 钟世根； 李兴升；

【机构】 重庆医大学超声影像学研究所；

【摘要】 目的制备一种载重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂,对其物理特性、载病毒的能力及在兔肝脏的显影效果进行研究;并研究超声破坏载重组腺病毒AdEGFP/HIF-1α的微泡对Ad-EGFP/HIF-1α生物学活性的影响。方法采用机械振荡法及分层吸附法制备携带重组腺病毒的脂质超声微泡造影剂,用DFY-II型超声图像定量分析诊断仪检测微泡粒径和浓度;检测其结合腺病毒的能力及观察对正常兔肝脏的显影效果。将脐静脉内皮细胞(HUVEC)接种在24孔板中,随机分为以下5组:(1)空白对照组:(2)重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α组;(3)载重组腺病毒A-EGFP/HIF-1α微泡组;(4)超声+重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1 d组:(5)超声+载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α微泡组。荧光显微镜及流式细胞仪检测各组在细胞内的表达及转染效率,RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA的表达。结果载重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α的超声微泡分布均匀,平均粒径为(1.17±0.82)μm,浓度为(2.50±0.12)×109/mL,与普通超声微泡相似;该造影剂的最大腺病毒结合的效率为30%;体内造影显示该造影剂能够有效增强兔肝脏实质回声。与对照组相比,各组间绿色荧光强度及转染率无明显差别;各组间HIF-1αmRNA的表达也无明显差别。结论自制载重组腺病毒的微泡造影剂符合理想超声造影剂的要求,性质稳定,制备简易,载腺病毒效率高,超声破坏该造影剂对腺病毒活性无明显影响,为拓展超声微泡介导的基因治疗领域提供了新的思路和方法。更多还原