K562细胞中HtrA2对WT1的调控意义及机制探讨

【作者】 张丽霞； 李艳； 房秋云； 邱少伟； 田征； 唐克晶； 刘兵城； 饶青； 王敏； 王建祥； 秘营昌；

【机构】 中国医学科学院血液病医院、血液学研究所,实验血液学国家重点实验室；

【摘要】 目的以K562细胞为对象,研究Htr A家族成员Htr A2对WT1蛋白的调控关系及其对K562细胞系生物学功能的影响,及相关机制探讨。方法采用实时定量PCR及Western Blot方法,检测药物和Htr A2抑制剂(UCF-101)处理细胞后WT1、Htr A2等在m RNA及蛋白水平的表达变化。分析不同药物和UCF-101处理后细胞增殖、凋亡情况。以及相关信号通路蛋白的表达改变。结果伊马替尼处理K562细胞,能够在转录水平上激活Htr A2基因使其表达上调,同时下调WT1基因的表达;UCF-101抑制Htr A2功能后,下调的WT1基因表达水平逐渐恢复。在蛋白水平,伊马替尼与高三尖杉酯碱(HHT)均能够诱导Htr A2蛋白上调(HHT作用较弱);同时伊马替尼显著下调WT1蛋白水平,UCF-101抑制Htr A2功能后,WT1蛋白水平一过性下调后呈现明显上调趋势。Htr A2抑制剂导致的WT1蛋白水平升高能够减少伊马替尼(P<0.05)和HHT诱导的K562细胞凋亡,但对药物产生的增殖抑制无明显改变。信号途径研究中,伊马替尼和HHT能够激活K562细胞中p-38MAPK途径,Htr A2抑制剂可以影响药物对p-38MAPK途径的激活。伊马替尼显著而持久的抑制了erk1/2途径,但UCF-101对其抑制无明显影响。结论 K562细胞中存在Htr A2对WT1的调控作用;Htr A2对WT1的调控能够影响K562细胞的凋亡,影响p-38 MAPK信号途径发挥生物学效应。更多还原