瞬时受体电位阳离子通道蛋白C5调控结肠癌细胞耐药的机制研究

【作者】 王腾； 华东； 吴小红； 汪林军；

【机构】 无锡市第四人民医院肿瘤内科；

【摘要】 目的:探讨及明确瞬时受体电位阳离子通道蛋白C5(transient receptor potential cation channel TRPC5)在结肠癌细胞中对耐药相关蛋白P-glycoprotein(P-gp)的调控作用。方法:采用人结肠癌细胞株HCT-8和对应的耐氟尿嘧啶的HCT-8/5-Fu,western-blot、real-time PCR以及免疫细胞荧光检测两株细胞中TRPC5、P-gp的基因、蛋白表达差异,siRNA下调TRPC5的mRNA表达后,realtime PCR、western-blot以及免疫细胞荧光检测HCT-8/5-Fu中TRPC5、P-gp的表达变化。针对TRPC5的封闭性抗体T5E3阻断TRPC5的功能,检测P-gp的表达变化。罗丹明摄取实验检验P-gp的泵功能,MTT法检测HCT-8和HCT-8/5-Fu的耐药指数。结果:HCT-8/5-Fu细胞的TRPC5和MDR1的mRNA和蛋白表达水平显著高于HCT-8细胞,T5E3作用于HCT-8/5-Fu后,P-gp蛋白亦显著降低。TRPC5-siRNA干扰下调HCT-8/5-Fu细胞的TRPC5的表达后,real-time PCR、westernblot以及免疫细胞荧光显示MDR1的mRNA水平及P-gp蛋白亦显著降低。罗丹明摄取实验P-gp泵功能下降,MTT显示,HCT-8/5-Fu的耐药指数下降。结论:在结肠癌耐药细胞中,TRPC5参与了P-gp表达的调控。更多还原