LIGHT表达质粒增强HIV-1 Nef核酸疫苗免疫原性的研究

【作者】 闻洁君； 郝文丽； 樊燕； 杜佳妮； 龙凤英； 江文正；

【机构】 华东师范大学生命科学学院；

【摘要】 研究背景:核酸疫苗的免疫效果在不同动物个体中差异较大,某些肿瘤及病毒的T、B细胞表位抗原性弱,难以诱导有效的T、B细胞免疫应答,提高核酸疫苗的免疫效果已成为研究热点。基因佐剂是将编码某些细胞因子及T、B细胞表面共刺激分子等的基因与目的基因克隆于同一载体或不同载体共同免疫动物,其表达的相应蛋白可起到佐剂的作用,从而大大增强T、B细胞的免疫应答水平。LIGHT是TNF配体家族的成员,可以共刺激T细胞增殖。HVEM是LIGHT介导T细胞活化的受体,LIGHT通过与HVEM结合发挥共刺激作用,参与T细胞增殖和细胞因子的产生。越来越多的证据表明LIGHT与其受体的相互作用可作为控制细胞免疫应答的潜在目标。目的:构建HIV-1 Nef核酸疫苗质粒和LIGHT真核表达质粒,通过二者单独或联合免疫后检测小鼠的体液免疫和细胞免疫水平,探讨HIV-1 Nef核酸疫苗的免疫原性及LIGHT真核表达质粒的免疫佐剂效应。方法:将HIV-1 Nef基因和小鼠LIGHT基因分别插入到真核表达载体pc DNA3.1(+)多克隆位点中,构建真核表达质粒pc DNA-Nef和pc DNA-LIGHT,重组质粒经双酶切进行鉴定。利用脂质体将pc DNA-Nef真核表达质粒体外转染He La细胞, RT-PCR和western blot检测其转录和表达。最后将HIV-1 Nef核酸疫苗质粒和LIGHT真核表达质粒分别单独或联合免疫Balb/c小鼠,三次免疫后检测小鼠血清中抗HIV-1 Nef抗体滴度、脾细胞特异性增殖及CTL杀伤水平。结果:酶切鉴定证明重组质粒构建正确。 RT-PCR和western blot检测分别证明了HIV-1 Nef基因在He La细胞中能够进行有效地转录和表达。动物免疫实验证明HIV-1 Nef核酸疫苗可有效诱导小鼠产生特异性抗体、脾细细胞特异性增殖和CTL特异性杀伤,而LIGHT联合免疫组小鼠的抗体水平和CTL杀伤能力显著高于HIV-1 Nef核酸疫苗单独免疫组(P<0.05)。结论:HIV-1 Nef核酸疫苗可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫,LIGHT真核表达质粒发挥了免疫佐剂效应,可增强核酸疫苗的免疫原性。更多还原