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重组 RTB蛋白诱导巨噬细胞活化及其机制研究

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【作者】 许娜刘文森袁红艳徐静王慧文常雅萍

【机构】 吉林大学白求恩医学院免疫学系中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所

【摘要】 研究背景:RTB(ricin binding subunit B)是蓖麻毒素糖蛋白的一个亚基,分子量32k Da。 RTB是一个两叶形或哑铃形结构的分子,由不同的两个球形区域构成相同的折叠拓扑结构,每一个区域又包括三个亚区(α,β,γ),只有1α和2β有明显的半乳糖结合活性。 RTB具有凝集素活性,功能主要为协助蓖麻毒素A链进入细胞内发挥生物学功能,因其能与细胞上含半乳糖的糖蛋白或糖脂结合,所以也常被用作蛋白表达载体。本研究采用本室纯化的重组 RTB蛋白探讨了其对小鼠巨噬细胞活化的影响及可能分子机制,为重组 RTB蛋白的免疫生物学活性研究提供新的资料。目的:探讨重组 RTB蛋白对小鼠巨噬细胞活化的影响及可能机制。方法:将小鼠巨噬细胞系 RAW264.7细胞培养于含不同浓度重组 RTB蛋白的培养基中,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测吞噬活性;Griess法检测上清中NO分泌,q RT-PCR法检测iNOSmRNA表达,western blot法检测iNOS蛋白表达。Elisa法检测细胞因子TNF-α分泌。流式细胞术检测细胞表面CD68和CD86的表达。Western blot检测NF-κBp65的表达及免疫荧光法观察NF-κB核转位变化。结果:重组 RTB蛋白组与对照组比较可促进 RAW264.7细胞的增殖活性与吞噬功能及NO分泌(P<0.05)且NO分泌具有时间和剂量依赖性;可促进iNOSmRNA及蛋白表达;流式细胞术检测发现 RAW264.7细胞细胞表面CD68和CD86表达显著增高; RAW264.7细胞上清中细胞因子的检测发现TNF-α的分泌增高(P<0.01);加入NF-κB阻断剂后TNF-α的分泌降低(P<0.01);western blot及免疫荧光结果显示NF-κB p65磷酸化水平升高,NF-κBp65活化入核增加,表明重组 RTB蛋白可通过NF-κB信号通路促进 RAW264.7细胞活化。结论:重组 RTB蛋白可以诱导巨噬细胞活化,其机制可能与NF-κB信号通路有关。

【关键词】 重组RTB蛋白巨噬细胞信号通路
  • 【会议录名称】 第八届全国免疫学学术大会论文集
  • 【会议名称】第八届全国免疫学学术大会
  • 【会议时间】2012-10-18
  • 【会议地点】中国重庆
  • 【分类号】R392
  • 【主办单位】中国免疫学会(Chinese Society for Immunology)
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