重组 RTB蛋白诱导巨噬细胞活化及其机制研究

【作者】 许娜； 刘文森； 袁红艳； 徐静； 王慧文； 常雅萍；

【机构】 吉林大学白求恩医学院免疫学系； 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所；

【摘要】 研究背景:RTB(ricin binding subunit B)是蓖麻毒素糖蛋白的一个亚基,分子量32k Da。 RTB是一个两叶形或哑铃形结构的分子,由不同的两个球形区域构成相同的折叠拓扑结构,每一个区域又包括三个亚区(α,β,γ),只有1α和2β有明显的半乳糖结合活性。 RTB具有凝集素活性,功能主要为协助蓖麻毒素A链进入细胞内发挥生物学功能,因其能与细胞上含半乳糖的糖蛋白或糖脂结合,所以也常被用作蛋白表达载体。本研究采用本室纯化的重组 RTB蛋白探讨了其对小鼠巨噬细胞活化的影响及可能分子机制,为重组 RTB蛋白的免疫生物学活性研究提供新的资料。目的:探讨重组 RTB蛋白对小鼠巨噬细胞活化的影响及可能机制。方法:将小鼠巨噬细胞系 RAW264.7细胞培养于含不同浓度重组 RTB蛋白的培养基中,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测吞噬活性;Griess法检测上清中NO分泌,q RT-PCR法检测iNOSmRNA表达,western blot法检测iNOS蛋白表达。Elisa法检测细胞因子TNF-α分泌。流式细胞术检测细胞表面CD68和CD86的表达。Western blot检测NF-κBp65的表达及免疫荧光法观察NF-κB核转位变化。结果:重组 RTB蛋白组与对照组比较可促进 RAW264.7细胞的增殖活性与吞噬功能及NO分泌(P<0.05)且NO分泌具有时间和剂量依赖性;可促进iNOSmRNA及蛋白表达;流式细胞术检测发现 RAW264.7细胞细胞表面CD68和CD86表达显著增高; RAW264.7细胞上清中细胞因子的检测发现TNF-α的分泌增高(P<0.01);加入NF-κB阻断剂后TNF-α的分泌降低(P<0.01);western blot及免疫荧光结果显示NF-κB p65磷酸化水平升高,NF-κBp65活化入核增加,表明重组 RTB蛋白可通过NF-κB信号通路促进 RAW264.7细胞活化。结论:重组 RTB蛋白可以诱导巨噬细胞活化,其机制可能与NF-κB信号通路有关。更多还原