苦瓜高频组培再生体系的建立

【作者】 吴海滨； 罗剑宁； 何晓莉； 郑晓明； 张长远； 罗少波； 龚浩；

【机构】 广东省农业科学院蔬菜研究所；

【摘要】 高效的离体再生体系是进行植物基因转化和基因功能研究的前提和关键。目前在苦瓜（Momordica charantia L.）中尚未建立完善的离体再生体系,存在再生率低、再生不稳定等问题。本研究拟在苦瓜中建立完善的高频再生体系,为苦瓜的转基因育种及功能基因研究建立基础。研究了苦瓜种子消毒药剂及消毒时间、无菌苗萌发条件、不同的植物生长调节剂组合对子叶、下胚轴、真叶等外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,同时研究了不同的植物生长调节剂对再生苗不定根诱导的影响及再生苗合理的移栽条件。结果表明,以当年的苦瓜种子为材料,萌发前将种子去壳,用10%次氯酸钠处理25min可以达到彻底消毒的效果;接种于1/2 MS培养基上,先暗培养3 d再转入光照条件下培养,在光照培养箱中2 000 lx,12 h光照条件下培养,培养温度为25²8℃,可获得长势整齐、生长健壮的无菌苗,萌发率最高可达80%以上。在参试的多种培养基中,以MS培养基中添加低浓度的TDZ诱导效果最好,外植体以种子萌发后6⁷ d的无菌苗子叶为最好。不同基因型的苦瓜品系对种子的萌发率和子叶不定芽诱导率有一定影响。当以苦瓜品系11124无菌苗的子叶作为外植体,在MS+0.5 mg·L^-1FDZ作为培养基条件下,不定芽诱导率最高达77.1%。待不定芽生长至大于1.5 cm时移入生根培养基中生根,结果表明苦瓜外植体不定根诱导的最佳培养基为MS+0.5 mg·L^-1IBA,诱导出的不定根数量多、粗壮。待不定芽在生根培养基上长出较多不定根后,取发育正常、生长健壮的无菌苗,炼苗一周后取出幼苗,洗净根部培养基,移植至灭菌的培养土中。在室内培养一周后,室温移栽定植至室外自然环境中,无菌苗成活率可达70%以上。本研究建立了完善的苦瓜高频再生体系,将推动苦瓜转基因及功能基因相关研究的进程。更多还原