枣60S核糖体蛋白L8-3的基因克隆及表达分析

【作者】 卜娇迪； 代丽； 刘孟军； 赵锦；

【机构】 河北农业大学生命科学学院； 河北农业大学中国枣研究中心；

【摘要】 核糖体是细胞进行蛋白质合成的重要场所。核糖体蛋白是一种植物中广泛存在的RNA结合蛋白,它与核糖体RNA共同组成了核糖体,该蛋白除具有组成核糖体和参与蛋白质生物合成的功能外,在DNA复制、转录加工、翻译调控、DNA修复及调控细胞凋亡和正常细胞的恶性转化中也起着重要的作用。鉴于该基因的重要作用,本试验中拟克隆枣60S核糖体蛋白的基因序列,并进行生物信息学和表达分析,旨在为该基因进一步的功能研究提供参考。以‘月光’枣叶片为试材,提取RNA经反转录获得cDNA,利用同源序列克隆和3’RACE技术,克隆全长序列,测序后对序列进行Blast比对,同时进行开放阅读框、氨基酸序列、分子量、等电点及保守结构域预测,分析蛋白质一级、二级和三级结构。用MEGA软件构建枣与其他7种植物60S核糖体蛋白基因的分子进化树。克隆获得了一个枣60S核糖体蛋白基因的序列全长,并命名为ZjRPL8-3。该基因的开放阅读框长度为783 bp,编码260个氨基酸残基,预测分子量为28.025 kD,理论等电点值为10.83;经进一步的保守结构域预测表明,该蛋白属于L2超家族;其氨基酸序列含有49个α-螺旋结构,70个扩展链,141个无规则卷曲,分别占氨基酸总量的18.85%、26.92%和54.23%,其中含大量的无规则卷曲;根据Burkhard(1996)的理论,ZjRPL8-3基因编码的蛋白为混合型蛋白。根据枣和其他7种植物的60S核糖体蛋白的同源序列构建分子进化树,表明枣ZjRPL8-3与蔷薇科植物中该基因的蛋白序列亲缘关系最近。以ZjHis3为内参,对ZjRPL8-3进行表达分析,结果表明该基因在‘冬枣’、‘月光’和‘星光’等3个枣品种和酸枣叶片中表达相对稳定。本结果为枣分子生物学研究提供了一个新的候选内参基因。更多还原