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鹅源副粘病毒NA-I株M基因真核表达载体的构建及鉴定
【机构】 吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要病原与疫病研究室；
【摘要】 将鹅源副粘病毒NA-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鹅源副粘病毒M基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增鹅源副粘病毒NA-1株M基因,预期扩增的M基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒NA-1株M基因片段,琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到M基因片段,经EcoR I,Sal I消化。将M基因克隆进入PCI-neo载体,转化大肠杆菌DH5α,挑选菌落,经限制性核酸内切酶Sal I和EcoRⅠ双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体PCI-neo-M构建成功,通过用脂质体转染哺乳动物细胞Vero细胞,用300μg/mlG418筛选4周,用间接免疫荧光实验证明M蛋白在细胞中表达,为下一步研究M基因功能奠定了基础。扩增的M基因测序后,与其他禽副粘病毒1型M基因进行了核苷酸、氨基酸序列,系统发育树的分析比较,为阐明鹅源副粘病毒NA-1株的遗传背景奠定了基础。
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会
- 【会议时间】2007-09-20
- 【会议地点】中国江西井冈山
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】解放军军事医学科学院军事兽医研究所、江西省畜牧兽医局