鹅源副粘病毒NA-1株HN基因真核表达载体的构建

【作者】 马爱霞； 丁壮； 宋子运； 徐明； 吴昊； 宣华；

【机构】 吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要病原与疫病研究室；

【摘要】 将鹅源副粘病毒NA-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鹅源副粘病毒HN基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增鹅源副粘病毒NA-1株HN基因,预期扩增的HN基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒NA-1株HN基因片段,琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到HN基因片段,经EcoR I,Sal I消化。将HN基因克隆进入PCI-neo载体,转化大肠杆菌DH5α,挑选菌落,经限制性核酸内切酶Sal I和EcoRⅠ双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体PCI-neo-HN构建成功,为下一步在哺乳动物细胞Vero细胞中表达打下良好的基础。扩增的HN基因测序后,与其他禽副粘病毒1型HN基因进行了核苷酸、氨基酸序列,为阐明鹅源副粘病毒NA-1株的遗传背景奠定了基础。更多还原