新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_88ac-ST₁-LT_B三价基因工程灭活疫苗候选菌株的构建

【作者】 卫广森； 许崇波； 王文成； 李尚波； 王卓； 苗玉和；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所； 大连大学生物工程学院； 辽宁省益康生物制品厂；

【摘要】 利用PCR和基因定点突变技术,从大肠杆菌C83902的质粒中扩增出K88ac基因、ST1突变基因和LTB基因,通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88ac-ST1-LTB融合基因表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)。经酶切鉴定和DNA序列分析证实,构建的重组质粒pXK88acST3LT5中含有K88ac-ST1-LTB融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经ELISA检测,重组菌株表达的K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够被ST1单抗、LTB和K88ac抗体识别。经乳鼠灌胃试验证实,表达的融合蛋白已丧失天然ST1肠毒素的毒性。免疫实验结果表明,K88ac-ST1-LTB融合蛋白能够诱发家兔产生血清抗体,该抗体具有中和天然ST1肠毒素毒性的作用,表明构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株。更多还原