沙地葡萄茎痘相关病毒PCR检测及基因变异分析

【作者】 朱红娟； 胡国君； 范旭东； 张尊平； 任芳； 董雅凤；

【机构】 中国农业科学院果树研究所 国家落叶果树脱毒中心；

【摘要】 葡萄皱木复合病(Rugose wood complex disease)是一种发生普遍、为害严重的葡萄病毒病。依其在指示植物上的症状表现分为葡萄栓皮病、Kober 5BB茎沟病、LN33茎沟病和沙地葡萄茎痘病等四种主要类型。该病可导致葡萄嫁接不亲和,开花延迟,生长衰退,甚至死亡。研究表明沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associatedvirus,GRSPaV)与沙地葡萄茎痘症状密切相关。此外,该病毒与Syrah衰退病、Richter 110叶脉坏死症以及美国密苏里州的酿酒葡萄"霞多丽"脉明症状均有显著的相关性。GRSPaV在我国研究较少,其分子特性及变异情况不明,检测体系不完善,不利于对该病毒进行有效防控。本研究采用RT-PCR方法对来自16个省市自治区的不同葡萄样品进行了检测,结果表明:除新疆外,其余15个地区的葡萄样品中均检测到了GRSPaV。检测的305株葡萄样品中,有114株带毒,平均带毒株率为37.4%。对检测结果进行分析发现,不同地区的葡萄品种带毒情况不同,品种带毒率最高的为88.9%,最低的为20.0%;不同地区的葡萄植株带毒情况也存在差别,葡萄植株带毒率最高的为75.0%,最低的为20%。GRSPaV主要随葡萄繁殖材料进行传播扩散,目前,尚未发现传毒介体,由于各地区苗木来源不同,导致了带毒率有所差异。筛选部分带毒样品进行克隆测序,克隆片段(905bp)覆盖GRSPaV的完整CP基因(780bp)及其两端的部分片段(125bp)。已从16个带毒样品中克隆得到目标序列,它们之间的同源性为81.3%～98.6%,截取16个片段的CP基因序列与NCBI上登录的GRSPaV序列进行比对分析,构建系统进化树。结果表明:所有GRSPaV分离物聚为两个大组,且各分离物间未表现明显的地域差异。更多还原