近江牡蛎P-糖蛋白基因cDNA全长序列的克隆和表达分析

【作者】 徐艳艳； 杨维东； 李宏业； 刘洁生；

【机构】 暨南大学生命科学技术学院；

【摘要】 腹泻性贝毒(diarrhetic shellfish poisoning,DSP)是一类常见贝毒素,贝类可通过摄食通过利玛原甲藻(Prorocentrum lima)等DSP产毒藻积累毒素,但并不影响其生存。为了深入考察P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在双壳贝类抗环境污染和毒素中的作用,本文采用RACE技术克隆出近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)P-gp基因的cDNA全长序列,并对其进行了生物信息学分析。以利玛原甲藻为DSP毒素来源,探讨了近江牡蛎DSP染毒后鳃、消化腺和外套膜等组织中DSP毒素主要成分大田软海绵酸(okadaic acid,OA)的积累和P-gp基因表达的变化情况。结果显示,近江牡蛎Pgp基因cDNA全长序列为5530 bp,包括437 bp的5′非编码区(5′-UTR)、1091 bp的3′端非编码区(3′-UTR)和4002 bp的ORF。近江牡蛎P-gp氨基酸全长序列与其他生物体中的蛋白P-gp/ABCB/MDR(multiple drug resistance)具有较高的相似性,具有ABC全分子转运体ABCB转运蛋白的典型结构特征。利玛原甲藻染毒72 h后,近江牡蛎鳃组织和消化腺中OA的含量分别增加了2.5倍和6.4倍,外套膜中OA含量无明显变化。与对照组相比,P-gp mRNA的表达量在鳃组织中增加2.4倍,消化腺中略有下降。Western Blot结果表明,染毒后所考察的各牡蛎组织中P-gp蛋白水平的表达均无显著性差异。综合所得结果,我们推测近江牡蛎对DSP毒素有一定的累积和耐受能力,P-gp可能在近江牡蛎抗DSP毒素的反应中发挥着重要的作用。更多还原