SVCV糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其单链抗体库的筛选与鉴定

【作者】 刘红； 郑晓聪； 张凤； 于力； 戴和平； 史秀杰； 兰文升； 花群义； 王津津； 贾鹏； 何俊强； 袁丽； 刘荭； 吴志新； 陈孝煊；

【机构】 华中农业大学水产学院； 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心； 中国科学院水生生物研究所；

【摘要】 本研究利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白,利用噬菌体抗体展示技术筛选抗SVCV单链抗体(scFv)。将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac-G转化E.coli DH10αBac感受态细胞,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含G基因的重组穿梭载体Bacmid-G,通过脂质体介导将Bacmid-G转染对数生长期的Sf9细胞,获得重组杆状病毒AcNPV-G。AcNPV-G感染Sf9细胞,超声破碎后离心取上清进行SDS-PAGE及Western blot试验,结果可见大小约为57 kDa的蛋白条带,并与羊抗SVCV血清发生特异性反应。间接免疫荧光试验在感染AcNPV-G的Sf9细胞中观察到荧光信号。试验结果表明,AcNPV-G在Sf9细胞中成功的表达了SVCV糖蛋白,且具有良好的免疫学活性。应用噬菌体抗体展示技术,用SVCV对噬菌体抗体库进行淘选。经过3轮富集淘选获得8株特异性较好的阳性克隆,对8株阳性克隆进行可溶性单链抗体诱导表达后进行Dot blot和Western blot分析,结果表明单链抗体分子量约为29 kDa,能特异性识别SVCV。ELISA结果表明单链抗体不与其他病毒蛋白发生交叉反应。间接免疫荧光试验结果表明8株单链抗体均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。本研究通过杆状病毒表达系统成功表达SVCV糖蛋白,以及利用噬菌体抗体展示技术成功筛选了8株能特异性识别SVCV的单链抗体,以期为深入研究SVCV糖蛋白的生物学活性和其在病毒侵染过程中的功能;特异性抗体制备及免疫学检测方法的建立奠定了基础。更多还原