转录激活因子ATF4调控葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94的转录激活

【作者】 樊启弟； 毛慧玲； 吴初新； 衷彬； 米一川； 胡成钰；

【机构】 南昌大学生命科学与食品工程学院；

【摘要】 为了研究草鱼转录激活因子ATF4调控GRP78和GRP94的转录模式,我们一方面克隆了草鱼GRP78和GRP94的启动子序列,然后,利用同源克隆的方法克隆了草鱼激活转录因子ATF4的ORF cDNA并原核表达获得纯化蛋白。经过体外凝胶阻滞分析ATF4能阻滞GRP78启动子和GRP94启动子全长片段,证实了调控因子ATF4与GRPs的顺式作用元件有亲和性。另一方面构建荧光素酶报告载体pGL3-GRP78P(906/19),pGL3-GRP94p(1048/1),构建真核表达载体pcDNA3.1-CiATF4,结合体内转染草鱼肾细胞(CIK)实验分析,证实转录激活因子ATF4可以调控草鱼葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94的转录。为了进一步确定ATF4的作用位点,实验突变GRP78的CRE和AARE位点以及克隆CRE,AARE位点全去除的GRP78启动子片段(714/162),体外凝胶阻滞分析ATF4对GRP78启动子CRE-mut,AARE-mut的片段和CRE/AARE-delete片段阻滞强度是否会有所衰减,同时构建荧光素酶报告载体pGL3-GRP78P-CREmut,pGL3-GRP78P-AAREmut,pGL3-GRP78P-CRE/AAREdelete,体内转染草鱼肾细胞(CIK)实验分析,证实转录激活因子ATF4可以通过位点CRE和AARE调控草鱼葡萄糖调节蛋白GRP78的转录激活。更多还原