灵芝降血糖活性单峰多糖F31的分离纯化及其初步结构分析

【作者】 肖春； 吴清平； 张菊梅； 蔡玟； 谭剑斌； 黄俊明；

【机构】 广东省微生物研究所,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东省华南应用微生物重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地； 广东省疾病预防控制中心；

【摘要】 目的本实验室前期的研究已经证实灵芝Ganaderma lucidum粗多糖(GLPs)对糖尿病(DM)小鼠具有降血糖作用,本研究旨在分离具有降血糖活性的单峰多糖,并初步明确其结构。方法以灵芝Ganaderma lucidum为研究对象,采取水提醇沉法提取GLPs,经过阴离子交换色谱DEAE Sepharose Fast Flowchromatography和分子筛Sephacryl S 300,分离纯化到四个单峰多糖,命名为F21,F22,F31,F32。降血糖作用采用6周龄的昆明种小鼠,使用链脲佐菌素(STZ)联合高脂高糖诱导的DM2模型,连续腹腔注射(50 mg/kg BW,ip)各单峰多糖7d,实验结束,测定血清血糖,统计分析。最后联合应用部分酸水解,高碘酸氧化和Smith降解、气质联用GC-MS、傅里叶红外光谱FTIR、核磁共振氢谱~1H-NMR和碳谱C-NMR等方法分析单峰多糖F31的初步结构。结果在受试的四个单峰多糖中,与DM模型对照组相比,仅有F31具有降血糖作用(P<0.05)。灵芝单峰多糖F31(多糖:蛋白质=83.9%:15.2%)是分子量为15.9 KD的多糖蛋白复合物。多糖部分主要由葡萄糖Glc、甘露糖Man、木糖Xyl、半乳糖Gal、核糖Rib、阿拉伯糖Ara组成,氨基酸的主要成分是天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、苏氨酸Thr、丝氨酸Ser、甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、脯氨酸Pro、缬氨酸Val、精氨酸Arg、亮氨酸Leu、赖氨酸Lys和异亮氨酸lle等。F31为β-构型糖苷键相连的吡喃环杂多糖,含有1→6位和1→3位键合的糖基,其比例1:1,主链由阿拉伯糖Ara、甘露糖Man、葡萄糖Glc组成。更多还原