红花黄酮醇合酶基因植物表达载体构建及转化

【作者】 杨文婷； 刘秀明； 姚娜； 董园园； 王南； 李海燕； 李校堃；

【机构】 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心； 吉林农业大学生命科学学院；

【摘要】 红花为菊科植物,是我国传统中药材,其活血化瘀功效被现代医学广泛应用于心血管疾病中。红花黄色素是红花主要有效成分之一,类黄酮类物质在红花整个代谢过程中产生重要作用,而红花黄色素作为主要的黄酮类物质代表,其研究具有重要意义。黄酮醇合酶基因是黄酮化合物合成途径中催化苯丙类物质代谢途径中分支途径的一个重要关键酶基因,在植物次级代谢过程的各个方面都起到重要作用。本研究通过提取红花花瓣总RNA,RT-PCR反转录为红花cDNA为模版。用PCR方法扩增目的基因,连接到pMD18-T载体上构建成克隆载体T-FLS,重组质粒用热激法转化大肠杆菌,PCR、酶切验证后,测序准确。用SamⅠ和XbaⅠ分别对克隆载体T-FLS和植物表达载体pBASTA进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T₄-DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体pBASTA-FLS。采用直接转化法将重组子导入根癌农杆菌LBA4404,经PCR鉴定,重组质粒已成功导人根癌农杆菌中。通过农杆菌介导法转化野生型拟南芥,经BASTA多次筛选和PCR鉴定后获得转基因植株T3代种子,确认转基因植株能够稳定遗传。本研究首次将控制类黄酮化合物合成的黄酮醇合酶基因成功地在拟南芥中得到表达,初步获得黄酮醇合酶基因的转基因株系,为进一步研究黄酮醇合酶基因在控制类黄酮化合物合成中的重要作用奠定了基础。更多还原