肺炎嗜衣原体热休克蛋白10经ERK、NF-κB信号通路调控HUVEC分泌炎症因子

【作者】 周洲； 李忠玉； 陈丽丽； 刘良专； 吴移谋；

【机构】 南华大学病原生物学研究所；

【摘要】 目的探讨ERK与NF-κB信号通路在肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)热休克蛋白10(Heatshock protein,HSP10)诱导HUVEC细胞分泌炎症因子中的作用。方法以制备并纯化的CHSP10对HUVEC诱生的炎症因子进行浓度和时间相关性检测。将CHSP10作用后的细胞裂解液,以抗磷酸化及抗总ERK单抗检测磷酸化ERK水平,用ERK特异性抑制剂U0126预孵育细胞30 min后,CHSP10刺激检测磷酸化ERK水平及炎症因子的水平;收获CHSP10作用后的细胞核蛋白提取物,EMSA鉴定CHSP10刺激后对HUVEC的NF-κB分子的活化作用,以NF-κB特异性抑制剂PDTC预孵育细胞60 min,CHSP10刺激后检测NF-κB通路的活化及炎症因子的水平。结果 CHSPs刺激宿主细胞分泌炎症因子的作用根据不同的蛋白剂量及不同刺激时间有所不同。在0.5～30μg/ml的浓度范围内,炎症因子水平随蛋白浓度的升高而呈上升趋势;在2～60 h的作用时间内,随刺激时间的延长,诱生炎症因子的水平逐渐升高,12 h时达到峰值;Western blot显示CHSP10刺激可诱生明显的磷酸化蛋白条带,在30 min时磷酸化ERK达到峰值,用UO126预孵育后,磷酸化ERK的量显著降低,同时CHSP10诱导HUVEC分泌的炎症因子水平也明显减少。EMSA结果显示,实验组出现蛋白与DNA结合的复合物迁移带,以蛋白作用60 min时浓度最深,用PDTC预孵育细胞后,蛋白/DNA复合物迁移带明显减弱甚至消失,同时,CHSP10刺激HUVEC分泌的炎症因子水平也明显减少。结论 CHSP10通过EKR及NF-κB信号通路参与Cpn对HUVEC细胞的致炎作用。更多还原